STUDIE VAN OVERLEVING EN FUNCTIONALITEIT IN CRYOPRESERVEERDE PLATELS

HYPOTHESE: Door cryopreservatie is het mogelijk om de overlevingstijd van bloedplaatjes tot 4 keer te verlengen in vergelijking met die bewaard onder de conventionele methode, met behoud van een levensvatbaarheid gelijk aan of groter dan 50%.

Er is een directe relatie tussen overlevingstijd, levensvatbaarheid en functionaliteit van gecryopreserveerde bloedplaatjes, afhankelijk van het gebruikte model van cryoprotectieve oplossing.

PRIMAIRE UITKOMST: overleving van ingevroren bloedplaatjes langer dan 28 dagen SECUNDAIRE UITKOMST: levensvatbaarheid van ingevroren bloedplaatjes meer dan 50%

INSLUITINGSCRITERIA: Concentraten van donoren ouder dan 18 jaar die voldoen aan de vereisten van wet 22990 (van de Argentijnse Republiek) voor het doneren van bloed en bloedbestanddelen zullen in deze studie worden opgenomen, van wie een aantal bloedplaatjes groter dan of gelijk aan 3 x10 E11 kan worden opgehaald.

UITSLUITINGSCRITERIA: Bloedplaatjesconcentraten die een van de volgende kenmerken vertonen, worden uitgesloten van het onderzoek:

Concentraten die niet voldoen aan alle normen die vereist zijn voor gebruik bij mensen of die ten tijde van het onderzoek meer dan 24 uur zijn verstreken sinds ze zijn verkregen.

Er zal een blind experimenteel onderzoek worden uitgevoerd (degenen die de levensvatbaarheid en functionaliteit van bloedplaatjes evalueren, zullen de cryopreservatietijden of de concentratie van het cryopreservatiemiddel niet kennen)

Aliquots van bloedplaatjes met groep en factor A +, A-, B +, B-, AB +, AB-, O + en O- verkregen van die mensen die als vrijwillige donor naar het hemotherapiecentrum komen en die op hun beurt hun beslissing kenbaar maken om deel te nemen aan dit protocol door een hiervoor ontworpen geïnformeerde toestemming te ondertekenen. Het verkrijgen van bloedplaatjes zal worden uitgevoerd door middel van aferese met behulp van de Trima ACCEL-celscheider, versie 7.0, merk TERUMO BCT.

Voor elke donor worden in totaal minimaal 3,3 x1011 bloedplaatjes verkregen in een volume tussen 200 - 300 ml.

Groep A: Het zal bestaan ​​uit 70 aliquots van 3 ml elk met 1,9 x109 bloedplaatjes waaraan een oplossing wordt toegevoegd die bestaat uit: 1 ml verkregen uit het volgende mengsel zal worden toegevoegd (0,8 ml 100% dimethylsulfoxide (DMSO) en 4 ml 0 natrium chloride, 9%). Vervolgens worden ze ingevroren bij -80°C.

Groep B: Het zal bestaan ​​uit 70 aliquots van 3 ml elk met 1,9 x109 bloedplaatjes waaraan een oplossing zal worden toegevoegd die bestaat uit: 0,4 ml 20% albumine van het merk UNC en 0,6 ml verkregen uit het volgende mengsel (1,4 ml dimethylsulfoxide (DMSO) 100% en 4 ml Dextrose 5%). Vervolgens worden ze ingevroren bij -80°C.

Groep C: Het bestaat uit 70 aliquots van 3 ml elk met 1,9 x109 bloedplaatjes waaraan een oplossing wordt toegevoegd die bestaat uit: 0,4 ml 20% UNC-albumine en 0,6 ml verkregen uit het volgende mengsel (1,4 ml dimethylsulfoxide (DMSO) 100% en 4 ml natriumchloride 0,9%). Vervolgens worden ze ingevroren bij -80°C.

Een groep van 71 aliquots van elk 3 ml met 1,9 x 109 bestraalde bloedplaatjes die gedurende 5 dagen bij 22°C onder constant roeren worden gehouden (vierentwintig aliquots voor elke geëvalueerde periode) zal worden gebruikt als referentie voor de vergelijking van de resultaten (groep N).

Levensvatbaarheid:

Het zal worden geëvalueerd aan de hand van het aantal bloedplaatjes uitgevoerd door het Beckman-Coulter-systeem, de meting van de pH van de gecryopreserveerde bloedplaatjes na ontdooiing (verwachte waarden tussen 6,4 en 7,4) en de immunofenotypering van de bloedplaatjes door flowcytometrie (CMF) met behulp van fluorescerende anti-CD61-PE-antilichamen.

Functionaliteit:

Het zal worden geëvalueerd op basis van de immunofenotypering van bloedplaatjes door middel van flowcytometrie (CMF) met behulp van fluorescerende anti-CD41- en anti-CD62-FITC-antilichamen.

Alvorens de CMF-analyse uit te voeren, wordt 4 microliter van een 50 mmol ADP-oplossing aan elk monster toegevoegd om activering van bloedplaatjes te induceren.

Zowel de levensvatbaarheidsanalyse als de functionaliteit van het gecryopreserveerde product zal worden uitgevoerd door 3 biochemici, samenwerkende leden van het onderzoek in het laboratorium voor biochemische analyse van het ziekenhuis.