ÉTUDE DE LA SURVIE ET ​​DE LA FONCTIONNALITÉ DES PLAQUETTES CRYOCONSERVÉES

HYPOTHÈSE : Grâce à la cryoconservation, il est possible de prolonger la durée de survie des plaquettes jusqu'à 4 fois, par rapport à celles conservées selon la méthode conventionnelle, en maintenant une viabilité égale ou supérieure à 50 %.

Il existe une relation directe entre le temps de survie, la viabilité et la fonctionnalité des plaquettes cryoconservées selon le modèle de solution cryoprotectrice utilisé.

OBJECTIF PRIMAIRE : survie des plaquettes cryoconservées supérieure à 28 jours OBJECTIF SECONDAIRE : viabilité des plaquettes cryoconservées supérieure à 50 %

CRITÈRES D'INCLUSION: Les concentrés de donneurs de plus de 18 ans qui répondent aux exigences établies par la loi 22990 (de la République argentine) pour le don de sang et de composants sanguins seront inclus dans cette étude, dont un nombre de plaquettes supérieur ou égal à 3 x10 E11 peut être collecté.

CRITÈRES D'EXCLUSION : Les concentrés de plaquettes qui présentent l'une des caractéristiques suivantes seront exclus de l'enquête :

Concentrés qui n'ont pas satisfait à toutes les normes requises pour une utilisation chez l'homme ou qui, au moment de l'étude, plus de 24 heures se sont écoulées depuis leur obtention.

Une étude expérimentale en aveugle sera réalisée (ceux qui évaluent la viabilité et la fonctionnalité des plaquettes ne connaîtront pas les temps de cryoconservation ni la concentration du cryoconservateur)

Aliquots de plaquettes de groupe et de facteur A+, A-, B+, B-, AB+, AB-, O+ et O- obtenus auprès des personnes qui viennent au centre d'hémothérapie en tant que donneurs volontaires et qui expriment à leur tour leur décision de participer à ce protocole en signant un consentement éclairé conçu à cet effet. L'obtention des plaquettes sera réalisée par aphérèse à l'aide du séparateur de cellules Trima ACCEL, version 7.0, marque TERUMO BCT.

Un total minimum de 3,3 x 1011 plaquettes sera obtenu dans un volume compris entre 200 et 300 ml, pour chaque donneur.

Groupe A : Il sera constitué de 70 aliquotes de 3 ml chacune avec 1,9 x109 plaquettes auxquelles on ajoutera une solution composée de : 1 ml obtenu à partir du mélange suivant (0,8 ml de Diméthylsulfoxyde 100% (DMSO) et 4 ml de 0 sodium chlorure , 9%). Ils seront ensuite congelés à -80°C.

Groupe B : Il sera constitué de 70 aliquotes de 3 ml chacune avec 1,9 x109 plaquettes auxquelles seront ajoutées une solution composée de : 0,4 ml d'albumine de marque UNC à 20% et 0,6 ml obtenu à partir du mélange suivant (1,4 ml de Diméthylsulfoxyde (DMSO) 100% et 4 ml de Dextrose 5%). Ils seront ensuite congelés à -80°C.

Groupe C : Il sera constitué de 70 aliquotes de 3 ml chacune avec 1,9 x109 plaquettes auxquelles seront ajoutées une solution composée de : 0,4 ml d'albumine de marque UNC à 20 % et 0,6 ml obtenu à partir du mélange suivant (1,4 ml de Diméthylsulfoxyde (DMSO) 100% et 4 ml de chlorure de sodium 0,9%). Ils seront ensuite congelés à -80°C.

Un groupe de 71 aliquotes de 3 ml chacune avec 1,9 x109 plaquettes irradiées maintenues à 22°C sous agitation constante pendant 5 jours (vingt-quatre aliquotes pour chaque période de temps évaluée) serviront de référence pour la comparaison des résultats (groupe N).

Viabilité:

Il sera évalué à travers la numération plaquettaire réalisée par le système Beckman-Coulter, la mesure du pH des plaquettes cryoconservées après décongélation (valeurs attendues entre 6,4 et 7,4) et l'immunophénotypage des plaquettes par cytométrie en flux (CMF) à l'aide anticorps fluorescents anti CD61-PE.

Fonctionnalité:

Elle sera évaluée à partir de l'immunophénotypage des plaquettes par cytométrie en flux (CMF) à l'aide d'anticorps fluorescents anti-CD41 et anti-CD62-FITC.

Avant de réaliser l'analyse CMF, 4 microlitres d'une solution d'ADP 50 mmol seront ajoutés à chaque échantillon afin d'induire l'activation plaquettaire.

L'analyse de viabilité et la fonctionnalité du produit cryoconservé seront réalisées par 3 biochimistes, membres collaborateurs de la recherche dans le laboratoire d'analyse biochimique de l'hôpital.