ИЗУЧЕНИЕ ВЫЖИВАЕМОСТИ И ФУНКЦИОНАЛЬНОСТИ КРИОКОНСЕРВИРОВАННЫХ ТРОМБоцитов

ГИПОТЕЗА: С помощью криоконсервации можно увеличить время выживания тромбоцитов до 4 раз по сравнению с теми, которые сохраняются традиционным методом, сохраняя жизнеспособность, равную или превышающую 50%.

Существует прямая зависимость между временем выживания, жизнеспособностью и функциональностью криоконсервированных тромбоцитов в зависимости от используемой модели криозащитного раствора.

ОСНОВНОЙ РЕЗУЛЬТАТ: выживаемость криоконсервированных тромбоцитов более 28 дней ВТОРИЧНЫЙ ИСХОД: жизнеспособность криоконсервированных тромбоцитов более 50%

КРИТЕРИИ ВКЛЮЧЕНИЯ: В данное исследование будут включены концентраты от доноров старше 18 лет, отвечающих требованиям, установленным законом 22990 (Аргентинской Республики) для донорства крови и компонентов крови, у которых число тромбоцитов больше или равно 3 х 10 Е11 можно собрать.

КРИТЕРИИ ИСКЛЮЧЕНИЯ: Концентраты тромбоцитов, обладающие любой из следующих характеристик, будут исключены из исследования:

Концентраты, не соответствующие всем стандартам, требуемым для применения у людей, или с момента их получения на момент проведения исследования прошло более 24 часов.

Будет проведено слепое экспериментальное исследование (те, кто оценивает жизнеспособность и функциональность тромбоцитов, не будут знать ни время криоконсервации, ни концентрацию криоконсерванта)

Аликвоты тромбоцитов с группой и фактором А+, А-, В+, В-, АВ+, АВ-, О+ и О-, полученные от тех людей, которые приходят в центр гемотерапии в качестве добровольных доноров и которые в свою очередь выражают свое решение участвовать в этом протоколе, подписав информированное согласие, предназначенное для этой цели. Получение тромбоцитов будет осуществляться методом афереза ​​с использованием сепаратора клеток Trima ACCEL версии 7.0 марки TERUMO BCT.

Для каждого донора будет получено минимум 3,3 x 1011 тромбоцитов в объеме 200–300 мл.

Группа A: она будет состоять из 70 аликвот по 3 мл каждая с 1,9 x 109 тромбоцитов, к которым будет добавлен раствор, состоящий из: 1 мл, полученного из следующей смеси (0,8 мл 100% диметилсульфоксида (ДМСО) и 4 мл 0 натрия хлорид, 9%). Затем они будут заморожены при температуре -80°C.

Группа B: будет состоять из 70 аликвот по 3 мл каждая с 1,9 x 109 тромбоцитов, к которым будет добавлен раствор, состоящий из: 0,4 мл 20% альбумина марки UNC и 0,6 мл, полученного из следующей смеси (1,4 мл диметилсульфоксида (ДМСО) 100% и 4 мл декстрозы 5%). Затем они будут заморожены при температуре -80°C.

Группа C: будет состоять из 70 аликвот по 3 мл каждая с 1,9 x 109 тромбоцитов, к которым будет добавлен раствор, состоящий из: 0,4 мл 20% альбумина марки UNC и 0,6 мл, полученного из следующей смеси (1,4 мл диметилсульфоксида (ДМСО) 100% и 4 мл 0,9% хлорида натрия). Затем они будут заморожены при температуре -80°C.

Группа из 71 аликвоты по 3 мл каждая с 1,9 x 109 облученных тромбоцитов, хранившаяся при 22 °C при постоянном перемешивании в течение 5 дней (двадцать четыре аликвоты для каждого оцениваемого периода времени), будет использоваться в качестве эталона для сравнения результатов (группа Н).

Жизнеспособность:

Его оценивают с помощью подсчета тромбоцитов с помощью системы Бекмана-Коултера, измерения pH криоконсервированных тромбоцитов после размораживания (ожидаемые значения от 6,4 до 7,4) и иммунофенотипирования тромбоцитов с помощью проточной цитометрии (CMF) с использованием флуоресцентные антитела против CD61-PE.

Функциональность:

Его будут оценивать по иммунофенотипированию тромбоцитов с помощью проточной цитометрии (CMF) с использованием флуоресцентных антител против CD41 и против CD62-FITC.

Перед проведением анализа CMF к каждому образцу добавляют 4 мкл 50 ммоль раствора АДФ, чтобы вызвать активацию тромбоцитов.

Как анализ жизнеспособности, так и функциональность криоконсервированного продукта будут проводить 3 биохимика, сотрудничающие с исследователями в лаборатории биохимического анализа больницы.