KRYOPÄILYTETTYJEN verihiutaleiden hengissäjäämis- ja toiminnallisuustutkimus

HYPOTEESI: Kryosäilytyksen avulla on mahdollista pidentää verihiutaleiden eloonjäämisaikaa jopa 4-kertaiseksi verrattuna perinteisellä menetelmällä säilöttyihin, säilyttäen 50 %:n tai sitä suuremman elinkelpoisuuden.

Kylmäsäilytettyjen verihiutaleiden eloonjäämisajan, elinkelpoisuuden ja toiminnallisuuden välillä on suora yhteys käytetyn kylmältä suojaavan liuoksen mallin mukaan.

ENSISIJAINEN TULOS: kylmäsäilytettyjen verihiutaleiden eloonjääminen yli 28 päivää SEKUNDAARI TULOS: kylmäsäilytettyjen verihiutaleiden elinkelpoisuus yli 50 %

SISÄLTÖPERUSTEET: Tähän tutkimukseen sisällytetään tiiviste, jotka ovat peräisin yli 18-vuotiailta luovuttajilta, jotka täyttävät laissa 22990 (Argentiinan tasavalta) asetetut vaatimukset veren ja veren komponenttien luovuttamiselle ja joiden verihiutaleiden määrä on suurempi tai yhtä suuri kuin 3 x 10 E11 voidaan kerätä.

POISKIELTÄMISKRITEERIT: Verihiutaletiivisteet, joilla on jokin seuraavista ominaisuuksista, jätetään tutkimuksen ulkopuolelle:

Konsentraatit, jotka eivät ole täyttäneet kaikkia ihmisillä käytettäväksi vaadittavia standardeja tai joiden hankinnasta on tutkimuksen aikaan kulunut yli 24 tuntia.

Suoritetaan sokea kokeellinen tutkimus (verihiutaleiden elinkelpoisuutta ja toimivuutta arvioivat eivät tiedä kylmäsäilytysaikoja tai kylmäsäilöntäaineen pitoisuutta)

Verihiutaleiden alikvootit ryhmällä ja tekijällä A +, A-, B +, B-, AB +, AB-, O + ja O- saatu niiltä henkilöiltä, ​​jotka tulevat hemoterapiakeskukseen vapaaehtoisina luovuttajina ja jotka puolestaan ​​ilmaisevat päätöksensä osallistua tähän pöytäkirjaan allekirjoittamalla tätä tarkoitusta varten laaditun tietoisen suostumuksen. Verihiutaleet hankitaan afereesilla käyttämällä Trima ACCEL -soluerotinta, versio 7.0, tuotemerkki TERUMO BCT.

Jokaista luovuttajaa kohden saadaan yhteensä vähintään 3,3 x 1011 verihiutaletta 200-300 ml:n tilavuudessa.

Ryhmä A: Se koostuu 70:stä 3 ml:n alikvootista, joissa kussakin on 1,9 x 109 verihiutaletta, joihin lisätään liuos, joka koostuu: 1 ml seuraavasta seoksesta (0,8 ml 100 % dimetyylisulfoksidia (DMSO) ja 4 ml 0 natriumia kloridi, 9 %). Sitten ne pakastetaan -80 °C:seen.

Ryhmä B: Se koostuu 70:stä 3 ml:n erästä, joissa kussakin on 1,9 x 109 verihiutaletta, joihin lisätään liuos, joka koostuu: 0,4 ml 20-prosenttista UNC-albumiinia ja 0,6 ml seuraavasta seoksesta (1,4 ml dimetyylisulfoksidia) (DMSO) 100 % ja 4 ml dekstroosia 5 %. Sitten ne pakastetaan -80 °C:seen.

Ryhmä C: Se koostuu 70:stä 3 ml:n erästä, joissa kussakin on 1,9 x 109 verihiutaletta, joihin lisätään liuos, joka koostuu: 0,4 ml 20-prosenttista UNC-albumiinia ja 0,6 ml, joka on saatu seuraavasta seoksesta (1,4 ml dimetyylisulfoksidia) (DMSO) 100 % ja 4 ml 0,9 % natriumkloridia). Sitten ne pakastetaan -80 °C:seen.

71:n 3 ml:n alikvootin ryhmää, jossa on 1,9 x 109 säteilytettyä verihiutaletta, joita pidettiin 22 °C:ssa jatkuvasti sekoittaen 5 päivän ajan (kaksikymmentäneljä alikvoottia kutakin arvioitua ajanjaksoa kohti), käytetään vertailuna tulosten vertailussa (ryhmä N).

Elinkelpoisuus:

Se arvioidaan Beckman-Coulter-järjestelmän suorittaman verihiutaleiden määrän, kylmäsäilytettyjen verihiutaleiden pH-arvon mittaamisen sulatuksen jälkeen (odotetut arvot välillä 6,4 - 7,4) ja verihiutaleiden immunofenotyypityksen avulla virtaussytometrillä (CMF) käyttämällä fluoresoivat anti-CD61-PE-vasta-aineet.

Toiminnallisuus:

Se arvioidaan verihiutaleiden immunofenotyypityksen perusteella virtaussytometrialla (CMF) käyttämällä fluoresoivia anti-CD41- ja anti-CD62-FITC-vasta-aineita.

Ennen CMF-analyysin suorittamista kuhunkin näytteeseen lisätään 4 mikrolitraa 50 mmol ADP-liuosta verihiutaleiden aktivaation indusoimiseksi.

Sekä elinkykyanalyysin että kylmäsäilytetyn tuotteen toimivuuden tekee 3 biokemistiä, jotka ovat mukana tutkimuksessa sairaalan biokemiallisen analyysin laboratoriossa.