STUDIE PŘEŽITÍ A FUNKČNOSTI V KRYOKONZERVOVANÝCH DESTIČKÁCH

HYPOTÉZA: Pomocí kryokonzervace je možné prodloužit dobu přežití krevních destiček až 4krát ve srovnání s destičkami konzervovanými konvenční metodou při zachování životaschopnosti rovné nebo vyšší než 50 %.

Existuje přímý vztah mezi dobou přežití, životaschopností a funkčností kryokonzervovaných destiček v závislosti na modelu použitého kryoprotektivního roztoku.

PRIMÁRNÍ VÝSLEDEK: přežití kryokonzervovaných krevních destiček delší než 28 dní SEKUNDÁRNÍ VÝSLEDEK: životaschopnost kryokonzervovaných krevních destiček větší než 50 %

KRITÉRIA ZAHRNUTÍ: Do této studie budou zahrnuty koncentráty od dárců starších 18 let, kteří splňují požadavky stanovené zákonem 22990 (Argentinská republika) pro darování krve a krevních složek, u kterých bude počet krevních destiček větší nebo roven 3 x 10 E11 lze sbírat.

KRITÉRIA PRO VYLOUČENÍ: Koncentráty krevních destiček, které vykazují některou z následujících charakteristik, budou ze šetření vyloučeny:

Koncentráty, které nesplňují všechny standardy požadované pro použití u lidí nebo které v době studie od jejich získání uplynulo více než 24 hodin.

Bude provedena slepá experimentální studie (ten, kdo hodnotí životaschopnost a funkčnost krevních destiček, nebude znát doby kryokonzervace ani koncentraci kryokonzervace)

Alikvoty krevních destiček se skupinou a faktorem A +, A-, B +, B-, AB +, AB-, O + a O- získané od lidí, kteří přicházejí do hemoterapeutického centra jako dobrovolní dárci a kteří obratem vyjádří své rozhodnutí účastnit se tohoto protokolu podpisem informovaného souhlasu určeného k tomuto účelu. Získání krevních destiček bude provedeno aferézou pomocí separátoru buněk Trima ACCEL, verze 7.0, značka TERUMO BCT.

Od každého dárce bude získáno minimálně 3,3 x 1011 krevních destiček v objemu 200 - 300 ml.

Skupina A: Bude sestávat ze 70 alikvotů po 3 ml, každý s 1,9 x 109 destičkami, ke kterým se přidá roztok složený z: 1 ml získaného z následující směsi (0,8 ml 100% dimethylsulfoxidu (DMSO) a 4 ml sodíku chlorid, 9 %). Poté budou zmrazeny na -80 °C.

Skupina B: Bude tvořena 70 alikvoty po 3 ml, každý s 1,9 x 109 destičkami, ke kterým bude přidán roztok složený z: 0,4 ml 20% albuminu značky UNC a 0,6 ml získaného z následující směsi (1,4 ml dimethylsulfoxidu (DMSO) 100 % a 4 ml dextrózy 5 %). Poté budou zmrazeny na -80 °C.

Skupina C: Bude tvořena 70 alikvoty po 3 ml, každý s 1,9 x 109 destičkami, ke kterým se přidá roztok složený z: 0,4 ml 20% albuminu značky UNC a 0,6 ml získaného z následující směsi (1,4 ml dimethylsulfoxidu (DMSO) 100% a 4 ml 0,9% chloridu sodného). Poté budou zmrazeny na -80 °C.

Skupina 71 alikvotů po 3 ml s 1,9 x 109 ozářenými destičkami udržovanými při 22 °C za stálého míchání po dobu 5 dnů (24 alikvotů pro každé hodnocené časové období) bude použita jako reference pro srovnání výsledků (skupina N).

Životaschopnost:

Bude hodnocena pomocí počtu krevních destiček provedeného systémem Beckman-Coulter, měřením pH kryokonzervovaných krevních destiček po rozmrazení (očekávané hodnoty mezi 6,4 a 7,4) a imunofenotypizací krevních destiček průtokovou cytometrií (CMF) s použitím fluorescenční anti CD61-PE protilátky.

Funkčnost:

Bude hodnocena z imunofenotypizace krevních destiček průtokovou cytometrií (CMF) s použitím fluorescenčních anti-CD41 a anti-CD62-FITC protilátek.

Před provedením analýzy CMF se ke každému vzorku přidají 4 mikrolitry 50 mmol roztoku ADP, aby se vyvolala aktivace krevních destiček.

Jak analýzu životaschopnosti, tak funkčnost kryokonzervovaného produktu provedou 3 biochemici, spolupracující členové výzkumu v laboratoři biochemické analýzy nemocnice.