BADANIE PRZEŻYWALNOŚCI I FUNKCJONALNOŚCI PŁYTEK ZABEZPIECZONYCH KRIOPRZERWANIEM

HIPOTEZA: Dzięki kriokonserwacji możliwe jest nawet 4-krotne wydłużenie czasu przeżycia płytek krwi w porównaniu z konserwowanymi metodą konwencjonalną, przy zachowaniu żywotności równej lub większej niż 50%.

Istnieje bezpośrednia zależność między czasem przeżycia, żywotnością i funkcjonalnością kriokonserwowanych płytek krwi w zależności od zastosowanego modelu roztworu krioochronnego.

REZULTAT PIERWOTNY: przeżycie kriokonserwowanych płytek krwi powyżej 28 dni REZULTAT DODATKOWY: żywotność kriokonserwowanych płytek krwi powyżej 50%

KRYTERIA WŁĄCZENIA: Do badania zostaną włączone koncentraty od dawców w wieku powyżej 18 lat, którzy spełniają wymagania ustanowione przez prawo 22990 (Republiki Argentyńskiej) dotyczące oddawania krwi i składników krwi, u których liczba płytek krwi jest większa lub równa 3 x 10 E11 można zebrać.

KRYTERIA WYKLUCZENIA: Koncentraty płytek krwi, które wykazują którąkolwiek z poniższych cech, zostaną wykluczone z badania:

Koncentraty, które nie spełniały wszystkich norm wymaganych do stosowania u ludzi lub które w momencie badania minęły więcej niż 24 godziny od ich uzyskania.

Zostanie przeprowadzone ślepe badanie eksperymentalne (ci, którzy oceniają żywotność i funkcjonalność płytek krwi, nie będą znali czasu kriokonserwacji ani stężenia środka kriokonserwującego)

Porcje płytek krwi z grupą i czynnikiem A+, A-, B+, B-, AB+, AB-, O+ i O- uzyskiwane od osób, które zgłaszają się do ośrodka hemoterapii jako dobrowolni dawcy i wyrażają swoją decyzję uczestniczenia w niniejszym protokole poprzez podpisanie świadomej zgody przeznaczonej do tego celu. Pobranie płytek krwi zostanie przeprowadzone metodą aferezy przy użyciu separatora komórek Trima ACCEL wersja 7.0 marki TERUMO BCT.

Od każdego dawcy zostanie uzyskanych co najmniej 3,3 x1011 płytek krwi w objętości od 200 do 300 ml.

Grupa A: Będzie się składać z 70 porcji po 3 ml każda, zawierających 1,9 x 109 płytek krwi, do których zostanie dodany roztwór składający się z: 1 ml otrzymanego z następującej mieszaniny (0,8 ml 100% dimetylosulfotlenku (DMSO) i 4 ml 0 sodu chlorek, 9%). Następnie zostaną zamrożone w temperaturze -80°C.

Grupa B: Będzie się składać z 70 podwielokrotności po 3 ml każda, zawierających 1,9 x 109 płytek krwi, do których zostanie dodany roztwór składający się z: 0,4 ml 20% markowej albuminy UNC i 0,6 ml otrzymanej z następującej mieszaniny (1,4 ml dimetylosulfotlenku (DMSO) 100% i 4 ml 5% dekstrozy. Następnie zostaną zamrożone w temperaturze -80°C.

Grupa C: Będzie się składać z 70 podwielokrotności po 3 ml każda, zawierających 1,9 x 109 płytek krwi, do których zostanie dodany roztwór złożony z: 0,4 ml 20% markowej albuminy UNC i 0,6 ml otrzymanej z następującej mieszaniny (1,4 ml dimetylosulfotlenku (DMSO) 100% i 4 ml 0,9% chlorku sodu). Następnie zostaną zamrożone w temperaturze -80°C.

Grupa 71 porcji po 3 ml każda z 1,9 x 109 napromienionych płytek krwi, przechowywanych w temperaturze 22°C przy ciągłym mieszaniu przez 5 dni (dwadzieścia cztery porcje na każdy oceniany okres) zostanie wykorzystana jako odniesienie do porównania wyników (grupa N).

Zdolność do życia:

Zostanie on oceniony na podstawie liczby płytek krwi przeprowadzonej za pomocą systemu Beckmana-Coultera, pomiaru pH kriokonserwowanych płytek krwi po rozmrożeniu (oczekiwane wartości między 6,4 a 7,4) oraz immunofenotypowania płytek krwi metodą cytometrii przepływowej (CMF) przy użyciu fluorescencyjne przeciwciała anty-CD61-PE.

Funkcjonalność:

Zostanie on oceniony na podstawie immunofenotypowania płytek krwi za pomocą cytometrii przepływowej (CMF) przy użyciu fluorescencyjnych przeciwciał anty-CD41 i anty-CD62-FITC.

Przed przeprowadzeniem analizy CMF do każdej próbki zostaną dodane 4 mikrolitry 50 mmol roztworu ADP w celu wywołania aktywacji płytek krwi.

Zarówno analiza żywotności, jak i funkcjonalność kriokonserwowanego produktu zostanie przeprowadzona przez 3 biochemików, współpracujących członków zespołu badawczego w laboratorium analiz biochemicznych szpitala.