ESTUDIO DE SUPERVIVENCIA Y FUNCIONALIDAD EN PLAQUETAS CRIOCONSERVADAS

HIPÓTESIS: Mediante la criopreservación es posible prolongar el tiempo de supervivencia de las plaquetas hasta 4 veces, en comparación con las conservadas bajo el método convencional, manteniendo una viabilidad igual o superior al 50%.

Existe una relación directa entre el tiempo de supervivencia, la viabilidad y la funcionalidad de las plaquetas criopreservadas según el modelo de solución crioprotectora utilizada.

RESULTADO PRIMARIO: supervivencia de plaquetas crioconservadas superior a 28 días RESULTADO SECUNDARIO: viabilidad de plaquetas crioconservadas superior al 50 %

CRITERIOS DE INCLUSIÓN: Se incluirán en este estudio los concentrados de donantes mayores de 18 años que cumplan con los requisitos establecidos por la ley 22990 (De la República Argentina) para la donación de sangre y componentes sanguíneos, de los cuales un número de plaquetas mayor o igual a 3 x10 E11 se puede recoger.

CRITERIOS DE EXCLUSIÓN: Se excluirán de la investigación los concentrados de plaquetas que presenten alguna de las siguientes características:

Concentrados que no hayan cumplido con todos los estándares exigidos para su uso en humanos o que en el momento del estudio hayan transcurrido más de 24 horas desde su obtención.

Se realizará un estudio experimental ciego (quienes evalúen viabilidad y funcionalidad de plaquetas no sabrán los tiempos de criopreservación ni la concentración del criopreservante)

Alícuotas de plaquetas con grupo y factor A+, A-, B+, B-, AB+, AB-, O+ y O- obtenidas de aquellas personas que acuden al centro de hemoterapia como donantes voluntarios y que a su vez manifiestan su decisión a participar en este protocolo mediante la firma de un consentimiento informado diseñado a tal efecto. La obtención de plaquetas se realizará por aféresis utilizando el separador celular Trima ACCEL, versión 7.0, marca TERUMO BCT.

Se obtendrá un total mínimo de 3,3 x1011 plaquetas en un volumen entre 200 - 300 ml, por cada donante.

Grupo A: Consistirá en 70 alícuotas de 3 ml cada una con 1,9 x109 plaquetas a las que se añadirá una solución compuesta por: 1 ml obtenido de la siguiente mezcla (0,8 ml de Dimetilsulfóxido (DMSO) al 100% y 4 ml de 0 sodio cloruro, 9%). Luego se congelarán a -80 °C.

Grupo B: Estará formado por 70 alícuotas de 3 ml cada una con 1,9 x109 plaquetas a las que se les añadirá una solución compuesta por: 0,4 ml de albúmina al 20% de la marca UNC y 0,6 ml obtenida de la siguiente mezcla (1,4 ml de Dimetilsulfóxido (DMSO) 100% y 4 ml de Dextrosa 5%). Luego se congelarán a -80 °C.

Grupo C: Estará formado por 70 alícuotas de 3 ml cada una con 1,9 x109 plaquetas a las que se añadirá una solución compuesta por: 0,4 ml de albúmina al 20% de la marca UNC y 0,6 ml obtenida de la siguiente mezcla (1,4 ml de Dimetilsulfóxido (DMSO) 100% y 4 ml de cloruro de sodio al 0,9%. Luego se congelarán a -80 °C.

Se utilizará como referencia para la comparación de resultados un grupo de 71 alícuotas de 3 ml cada una con 1,9 x109 plaquetas irradiadas mantenidas a 22°C en agitación constante durante 5 días (veinticuatro alícuotas por cada periodo de tiempo evaluado) (grupo NORTE).

Viabilidad:

Se evaluará a través del recuento de plaquetas realizado por el sistema Beckman-Coulter, la medida del pH de las plaquetas criopreservadas después de ser descongeladas (valores esperados entre 6,4 y 7,4) y el inmunofenotipado de las plaquetas por citometría de flujo (CMF) utilizando anticuerpos fluorescentes anti CD61-PE.

Funcionalidad:

Se evaluará a partir del inmunofenotipado de plaquetas por citometría de flujo (CMF) utilizando anticuerpos fluorescentes anti-CD41 y anti-CD62-FITC.

Antes de realizar el análisis CMF, se añadirán a cada muestra 4 microlitros de una solución de ADP 50 mmol para inducir la activación plaquetaria.

Tanto el análisis de viabilidad como la funcionalidad del producto criopreservado lo realizarán 3 bioquímicos, miembros colaboradores de la investigación en el laboratorio de análisis bioquímicos del hospital.