ESTUDO DE SOBREVIVÊNCIA E FUNCIONALIDADE EM PLAQUETAS CRIOPRESERVADAS

HIPÓTESE: Através da criopreservação é possível prolongar o tempo de sobrevida das plaquetas em até 4 vezes, em relação às preservadas pelo método convencional, mantendo uma viabilidade igual ou superior a 50%.

Existe uma relação direta entre tempo de sobrevida, viabilidade e funcionalidade das plaquetas criopreservadas dependendo do modelo de solução crioprotetora utilizada.

RESULTADO PRIMÁRIO: sobrevivência de plaquetas criopreservadas maior que 28 dias RESULTADO SECUNDÁRIO: viabilidade de plaquetas criopreservadas maior que 50%

CRITÉRIOS DE INCLUSÃO: Serão incluídos neste estudo concentrados de doadores maiores de 18 anos que cumpram os requisitos estabelecidos pela lei 22990 (República Argentina) para doar sangue e hemocomponentes, dos quais um número de plaquetas maior ou igual a 3 x10 E11 pode ser coletado.

CRITÉRIOS DE EXCLUSÃO: Serão excluídos da investigação os concentrados de plaquetas que apresentarem qualquer uma das seguintes características:

Concentrados que não atenderam a todos os padrões exigidos para uso em humanos ou que, no momento do estudo, passaram mais de 24 horas desde que foram obtidos.

Será realizado um estudo experimental cego (quem avaliar a viabilidade e funcionalidade das plaquetas não saberá os tempos de criopreservação nem a concentração do criopreservante)

Alíquotas de plaquetas com grupo e fator A+, A-, B+, B-, AB+, AB-, O+ e O- obtidas daquelas pessoas que chegam ao centro de hemoterapia como doadores voluntários e que por sua vez manifestam sua decisão a participar neste protocolo mediante a assinatura de um consentimento informado elaborado para o efeito. A obtenção das plaquetas será realizada por aférese utilizando o separador de células Trima ACCEL, versão 7.0, marca TERUMO BCT.

Será obtido um total mínimo de 3,3 x1011 plaquetas em um volume entre 200 - 300 ml, para cada doador.

Grupo A: Será composto por 70 alíquotas de 3 ml cada com 1,9 x 109 plaquetas às quais será adicionada uma solução composta por: 1 ml obtido da seguinte mistura (0,8 ml de Dimetilsulfóxido 100% (DMSO) e 4 ml de 0 sódio cloreto, 9%). Eles serão então congelados a -80 ° C.

Grupo B: Será composto por 70 alíquotas de 3 ml cada com 1,9 x109 plaquetas às quais será adicionada uma solução composta por: 0,4 ml de albumina da marca UNC 20% e 0,6 ml obtido da seguinte mistura (1,4 ml de Dimetilsulfóxido (DMSO) 100% e 4 ml de Dextrose 5%). Eles serão então congelados a -80 ° C.

Grupo C: Será composto por 70 alíquotas de 3 ml cada com 1,9 x109 plaquetas às quais será adicionada uma solução composta por: 0,4 ml de albumina da marca UNC 20% e 0,6 ml obtido da seguinte mistura (1,4 ml de Dimetilsulfóxido (DMSO) 100% e 4 ml de cloreto de sódio 0,9%). Eles serão então congelados a -80 ° C.

Um grupo de 71 alíquotas de 3 ml cada com 1,9 x109 plaquetas irradiadas mantidas a 22°C sob agitação constante por 5 dias (vinte e quatro alíquotas para cada período de tempo avaliado) será utilizado como referência para a comparação dos resultados (grupo n).

Viabilidade:

Será avaliado através da contagem de plaquetas realizada pelo sistema Beckman-Coulter, medição do pH das plaquetas criopreservadas após descongelamento (valores esperados entre 6,4 e 7,4) e imunofenotipagem das plaquetas por citometria de fluxo (CMF) utilizando anticorpos fluorescentes anti CD61-PE.

Funcionalidade:

Será avaliado a partir da imunofenotipagem das plaquetas por citometria de fluxo (CMF) utilizando anticorpos fluorescentes anti-CD41 e anti-CD62-FITC.

Antes de realizar a análise CMF, 4 microlitros de uma solução de 50 mmol ADP serão adicionados a cada amostra para induzir a ativação plaquetária.

Tanto a análise de viabilidade quanto a funcionalidade do produto criopreservado serão realizadas por 3 bioquímicos, membros colaboradores da pesquisa no laboratório de análises bioquímicas do hospital.