UNDERSØGELSE AF OVERLEVELSE OG FUNKTIONALITET I KRYOPRESERVEREDE TROMBLADER

HYPOTESE: Gennem kryopræservering er det muligt at forlænge overlevelsestiden for blodplader op til 4 gange sammenlignet med dem, der er bevaret under den konventionelle metode, og opretholde en levedygtighed lig med eller større end 50%.

Der er en direkte sammenhæng mellem overlevelsestid, levedygtighed og funktionalitet af kryokonserverede blodplader afhængigt af modellen af ​​den anvendte kryobeskyttende opløsning.

PRIMÆRT RESULTAT: overlevelse af kryokonserverede blodplader i mere end 28 dage SEKUNDÆR UDKOMM: levedygtighed af kryokonserverede blodplader større end 50 %

INKLUSIONSKRITERIER: Koncentrater fra donorer over 18 år, der opfylder kravene fastsat ved lov 22990 (af den argentinske republik) for donation af blod og blodkomponenter, vil blive inkluderet i denne undersøgelse, hvorfra et antal blodplader større end eller lig med 3 x10 E11 kan afhentes.

EXKLUSIONSKRITERIER: Blodpladekoncentrater, der har nogen af ​​følgende egenskaber, vil blive udelukket fra undersøgelsen:

Koncentrater, der ikke har opfyldt alle de standarder, der kræves til brug hos mennesker, eller som på tidspunktet for undersøgelsen er gået mere end 24 timer, siden de blev opnået.

En blind eksperimentel undersøgelse vil blive udført (de, der vurderer levedygtighed og funktionalitet af blodplader, kender ikke kryokonserveringstiden eller koncentrationen af ​​kryokonserveringsmidlet)

Alikvoter af blodplader med gruppe og faktor A+, A-, B+, B-, AB+, AB-, O+ og O- opnået fra de personer, der kommer til hæmoterapicentret som frivillige donorer, og som igen udtrykker deres beslutning at deltage i denne protokol ved at underskrive et informeret samtykke designet til dette formål. Indsamling af blodplader vil blive udført ved aferese ved hjælp af Trima ACCEL-celleseparator, version 7.0, TERUMO BCT-mærket.

Der opnås minimum 3,3 x1011 blodplader i et volumen mellem 200 - 300 ml for hver donor.

Gruppe A: Den vil bestå af 70 alikvoter á 3 ml hver med 1,9 x 109 blodplader, hvortil der tilsættes en opløsning bestående af: 1 ml opnået fra følgende blanding (0,8 ml 100 % dimethylsulfoxid (DMSO) og 4 ml 0 natrium chlorid, 9%). De fryses derefter ved -80°C.

B-gruppe: Den består af 70 alikvoter á 3 ml hver med 1,9 x 109 blodplader, hvortil der tilsættes en opløsning bestående af: 0,4 ml 20% UNC-mærkealbumin og 0,6 ml opnået fra følgende blanding (1,4 ml dimethylsulfoxid) (DMSO) 100 % og 4 ml dextrose 5 %). De fryses derefter ved -80°C.

Gruppe C: Den består af 70 alikvoter á 3 ml hver med 1,9 x 109 blodplader, hvortil der tilsættes en opløsning bestående af: 0,4 ml 20% UNC-mærkealbumin og 0,6 ml opnået fra følgende blanding (1,4 ml dimethylsulfoxid) (DMSO) 100% og 4 ml 0,9% natriumchlorid). De fryses derefter ved -80°C.

En gruppe på 71 alikvoter á 3 ml hver med 1,9 x109 bestrålede blodplader holdt ved 22 °C under konstant omrøring i 5 dage (fireogtyve alikvoter for hver evalueret tidsperiode) vil blive brugt som reference til sammenligning af resultater (gruppe). N).

Levedygtighed:

Det vil blive evalueret gennem blodpladetællingen udført af Beckman-Coulter-systemet, måling af pH af de kryokonserverede blodplader efter optøning (forventede værdier mellem 6,4 og 7,4) og immunfænotypebestemmelse af blodpladerne ved flowcytometri (CMF) vha. fluorescerende anti CD61-PE antistoffer.

Funktionalitet:

Det vil blive evalueret ud fra immunfænotypning af blodplader ved flowcytometri (CMF) ved anvendelse af fluorescerende anti-CD41 og anti-CD62-FITC antistoffer.

Før CMF-analysen udføres, tilsættes 4 mikroliter af en 50 mmol ADP-opløsning til hver prøve for at inducere blodpladeaktivering.

Både levedygtighedsanalysen og funktionaliteten af ​​det kryokonserverede produkt vil blive udført af 3 biokemikere, samarbejdende medlemmer af forskningen i hospitalets biokemiske analyselaboratorium.