STUDIO DELLA SOPRAVVIVENZA E FUNZIONALITA' IN PIASTRINE CRYOPRESERVATE

IPOTESI: Attraverso la crioconservazione è possibile prolungare il tempo di sopravvivenza delle piastrine fino a 4 volte, rispetto a quelle conservate con metodo convenzionale, mantenendo una vitalità pari o superiore al 50%.

Esiste una relazione diretta tra tempo di sopravvivenza, vitalità e funzionalità delle piastrine crioconservate a seconda del modello di soluzione crioprotettiva utilizzata.

ESITO PRIMARIO: sopravvivenza delle piastrine crioconservate superiore a 28 giorni ESITO SECONDARIO: vitalità delle piastrine crioconservate superiore al 50%

CRITERI DI INCLUSIONE: Saranno inclusi in questo studio concentrati provenienti da donatori di età superiore ai 18 anni che soddisfano i requisiti stabiliti dalla legge 22990 (della Repubblica Argentina) per la donazione di sangue ed emocomponenti, dai quali un numero di piastrine maggiore o uguale a 3 x10 E11 può essere raccolto.

CRITERI DI ESCLUSIONE: I concentrati piastrinici che presentano una delle seguenti caratteristiche saranno esclusi dall'indagine:

Concentrati che non hanno soddisfatto tutti gli standard richiesti per l'uso nell'uomo o che al momento dello studio sono trascorse più di 24 ore da quando sono stati ottenuti.

Verrà effettuato uno studio sperimentale in cieco (chi valuta la vitalità e la funzionalità delle piastrine non conoscerà i tempi di crioconservazione o la concentrazione del crioconservante)

Aliquote di piastrine con gruppo e fattore A+, A-, B+, B-, AB+, AB-, O+ e O- ottenute da quelle persone che si presentano al centro di emoterapia come donatori volontari e che a loro volta esprimono la loro decisione di partecipare al presente protocollo firmando un consenso informato predisposto a tale scopo. L'ottenimento delle piastrine sarà effettuato mediante aferesi utilizzando il separatore di cellule Trima ACCEL, versione 7.0, marca TERUMO BCT.

Verrà ottenuto un totale minimo di 3,3 x1011 piastrine in un volume compreso tra 200 e 300 ml, per ciascun donatore.

Gruppo A: Sarà composto da 70 aliquote da 3 ml ciascuna con 1,9 x109 piastrine a cui verrà aggiunta una soluzione composta da: 1 ml ottenuto dalla seguente miscela (0,8 ml di 100% Dimethylsulfoxide (DMSO) e 4 ml di 0 sodio cloruro, 9%). Verranno poi congelati a -80°C.

Gruppo B: Sarà costituito da 70 aliquote da 3 ml ciascuna con 1,9 x109 piastrine alle quali verrà aggiunta una soluzione composta da: 0,4 ml di albumina marca UNC 20% e 0,6 ml ottenuti dalla seguente miscela (1,4 ml di Dimetilsolfossido (DMSO) 100% e 4 ml di Destrosio 5%). Verranno poi congelati a -80°C.

Gruppo C: Sarà costituito da 70 aliquote da 3 ml ciascuna con 1,9 x109 piastrine alle quali verrà aggiunta una soluzione composta da: 0,4 ml di albumina marca UNC 20% e 0,6 ml ottenuti dalla seguente miscela (1,4 ml di Dimetilsolfossido (DMSO) 100% e 4 ml di cloruro di sodio allo 0,9%). Verranno poi congelati a -80°C.

Un gruppo di 71 aliquote da 3 ml ciascuna con 1.9 x109 piastrine irradiate mantenute a 22°C sotto costante agitazione per 5 giorni (ventiquattro aliquote per ogni periodo di tempo valutato) verrà utilizzato come riferimento per il confronto dei risultati (gruppo N).

Viabilità:

Sarà valutata attraverso la conta piastrinica effettuata con il sistema Beckman-Coulter, la misurazione del pH delle piastrine criopreservate dopo lo scongelamento (valori attesi tra 6,4 e 7,4) e l'immunofenotipizzazione delle piastrine mediante citometria a flusso (CMF) utilizzando anticorpi anti CD61-PE fluorescenti.

Funzionalità:

Sarà valutato dall'immunofenotipizzazione delle piastrine mediante citometria a flusso (CMF) utilizzando anticorpi fluorescenti anti-CD41 e anti-CD62-FITC.

Prima di eseguire l'analisi CMF, verranno aggiunti a ciascun campione 4 microlitri di una soluzione di ADP 50 mmol per indurre l'attivazione piastrinica.

Sia l'analisi di vitalità che la funzionalità del prodotto crioconservato saranno effettuate da 3 biochimici, membri collaboratori della ricerca nel laboratorio di analisi biochimiche dell'ospedale.