UNTERSUCHUNG DES ÜBERLEBENS UND DER FUNKTIONALITÄT IN KRYOPPARIERTEN PLÄTTCHEN

HYPOTHESE: Durch Kryokonservierung ist es möglich, die Überlebenszeit von Blutplättchen bis zu 4-mal zu verlängern, verglichen mit denen, die nach der herkömmlichen Methode konserviert werden, wobei eine Lebensfähigkeit von mindestens 50 % aufrechterhalten wird.

Es besteht ein direkter Zusammenhang zwischen Überlebenszeit, Lebensfähigkeit und Funktionalität kryokonservierter Blutplättchen, abhängig vom Modell der verwendeten kryoprotektiven Lösung.

PRIMÄRES ERGEBNIS: Überleben kryokonservierter Blutplättchen von mehr als 28 Tagen SEKUNDÄRES ERGEBNIS: Lebensfähigkeit kryokonservierter Blutplättchen von mehr als 50 %

EINSCHLUSSKRITERIEN: Konzentrate von Spendern über 18 Jahren, die die Anforderungen des Gesetzes 22990 (der Argentinischen Republik) für die Spende von Blut und Blutbestandteilen erfüllen, werden in diese Studie aufgenommen, von denen eine Anzahl von Blutplättchen größer oder gleich 3 x 10 ist E11 kann gesammelt werden.

AUSSCHLUSSKRITERIEN: Thrombozytenkonzentrate, die eines der folgenden Merkmale aufweisen, werden von der Untersuchung ausgeschlossen:

Konzentrate, die nicht alle für die Anwendung beim Menschen erforderlichen Standards erfüllt haben oder deren Erhalt zum Zeitpunkt der Studie mehr als 24 Stunden zurückliegt.

Es wird eine experimentelle Blindstudie durchgeführt (diejenigen, die die Lebensfähigkeit und Funktionalität von Blutplättchen bewerten, kennen weder die Kryokonservierungszeiten noch die Konzentration des Kryokonservierungsmittels).

Aliquots von Blutplättchen mit Gruppe und Faktor A+, A-, B+, B-, AB+, AB-, O+ und O- erhalten von jenen Personen, die als freiwillige Spender in das Hämotherapiezentrum kommen und ihrerseits ihre Entscheidung äußern an diesem Protokoll teilzunehmen, indem Sie eine für diesen Zweck konzipierte Einverständniserklärung unterzeichnen. Die Gewinnung von Blutplättchen wird durch Apherese unter Verwendung des Zellseparators Trima ACCEL, Version 7.0, Marke TERUMO BCT, durchgeführt.

Für jeden Spender werden insgesamt mindestens 3,3 x 1011 Blutplättchen in einem Volumen zwischen 200 und 300 ml gewonnen.

Gruppe A: Sie besteht aus 70 Aliquots von jeweils 3 ml mit 1,9 x 109 Blutplättchen, zu denen eine Lösung bestehend aus: 1 ml, erhalten aus der folgenden Mischung, hinzugefügt wird (0,8 ml 100 % Dimethylsulfoxid (DMSO) und 4 ml 0 Natrium Chlorid, 9 %). Anschließend werden sie bei -80 °C eingefroren.

B-Gruppe: Sie besteht aus 70 Aliquots von jeweils 3 ml mit 1,9 x 109 Blutplättchen, denen eine Lösung zugesetzt wird, die zusammengesetzt ist aus: 0,4 ml 20 % UNC-Markenalbumin und 0,6 ml, erhalten aus der folgenden Mischung (1,4 ml Dimethylsulfoxid (DMSO) 100 % und 4 ml Dextrose 5 %). Anschließend werden sie bei -80 °C eingefroren.

Gruppe C: Sie besteht aus 70 Aliquots von jeweils 3 ml mit 1,9 x 109 Blutplättchen, denen eine Lösung zugesetzt wird, die zusammengesetzt ist aus: 0,4 ml 20 % UNC-Markenalbumin und 0,6 ml, erhalten aus der folgenden Mischung (1,4 ml Dimethylsulfoxid (DMSO) 100 % und 4 ml 0,9 % Natriumchlorid). Anschließend werden sie bei -80 °C eingefroren.

Eine Gruppe von 71 Aliquots von jeweils 3 ml mit 1,9 x 109 bestrahlten Blutplättchen, die 5 Tage lang bei 22 °C unter ständigem Rühren gehalten wurden (vierundzwanzig Aliquots für jeden ausgewerteten Zeitraum), wird als Referenz für den Vergleich der Ergebnisse verwendet (Gruppe N).

Lebensfähigkeit:

Sie wird anhand der Thrombozytenzählung mit dem Beckman-Coulter-System, der Messung des pH-Werts der kryokonservierten Thrombozyten nach dem Auftauen (Erwartungswerte zwischen 6,4 und 7,4) und der Immunphänotypisierung der Thrombozyten mittels Durchflusszytometrie (CMF) ausgewertet fluoreszierende Anti-CD61-PE-Antikörper.

Funktionalität:

Es wird anhand der Immunphänotypisierung von Blutplättchen durch Durchflusszytometrie (CMF) unter Verwendung von fluoreszierenden Anti-CD41- und Anti-CD62-FITC-Antikörpern bewertet.

Vor der Durchführung der CMF-Analyse werden jeder Probe 4 Mikroliter einer 50-mmol-ADP-Lösung zugesetzt, um die Thrombozytenaktivierung zu induzieren.

Sowohl die Lebensfähigkeitsanalyse als auch die Funktionalität des kryokonservierten Produkts werden von 3 Biochemikern durchgeführt, die an der Forschung im biochemischen Analyselabor des Krankenhauses mitarbeiten.