Aktywność CYP2C9 oceniana za pomocą prostego nakłucia palca

Enzymy cytochromu P450 (CYP) są głównym układem enzymatycznym metabolizującym leki u ludzi. Duża zmienność międzyosobnicza wpływa na aktywność tych enzymów, a co za tym idzie na stężenia leków w osoczu, co skutkuje różnymi efektami farmakodynamicznymi i występowaniem skutków ubocznych. Za tę zmienność odpowiadają czynniki środowiskowe, dieta, leki lub genetyka. Czynniki genetyczne są bardzo ważne, ponieważ większość tych enzymów jest wysoce polimorficzna. Na przykład dotychczas odkryto ponad 80 wariantów allelicznych CYP2D6, które są związane z brakiem, spadkiem lub wzrostem aktywności enzymu. Większość polimorfizmów wykryto na podstawie działań niepożądanych występujących w grupie w populacji po podaniu normalnych dawek leków. Pacjenci, u których wystąpiły działania niepożądane, często mieli zmniejszoną zdolność metabolizowania niektórych leków. W terapii klinicznej ta zmienność ma istotne konsekwencje, w tym brak odpowiedzi na leczenie i/lub działania niepożądane leków. W celu ograniczenia tych potencjalnie niepożądanych zdarzeń, które mogą prowadzić do poważnych działań niepożądanych lub śmierci, decydujące znaczenie może mieć możliwość oceny aktywności tych enzymów na poziomie indywidualnym. Do oceny aktywności CYP można zastosować dwa podejścia, genotyp i fenotyp. Genotyp opiera się na analizie DNA i wykrywaniu polimorfizmu. Fenotyp polega na podaniu „modelowego” leku lub leku sondy metabolizowanej przez określony CYP i określeniu stosunku między lekiem a jego metabolitem w osoczu lub moczu. Główną wadą metod fenotypowania jest pobieranie moczu przez noc lub co najmniej 8 godzin po podaniu testu z sondą. Procedura ta jest bardzo żmudna i czasochłonna zarówno dla pacjenta, jak i personelu medycznego. Badanie można wykonać w osoczu lub krwi po 1-2 godzinach od podania sondy. Jednak ta procedura jest inwazyjna i wymaga znacznej objętości krwi (6 ml). Niedawno opracowano nowe podejście do ilościowego oznaczania stężeń krążących leków za pomocą wysuszonych plam krwi (DBS) na bibule filtracyjnej uzyskanej za pomocą prostego nakłucia palca. Ze względu na wymaganą niewielką objętość krwi (około 10 µl) w porównaniu z konwencjonalnym pobieraniem krwi, ta minimalnie inwazyjna metoda stanowi przyjazną dla pacjenta alternatywę pobierania krwi w populacji pacjentów, w których pobieranie krwi żylnej jest nieetyczne lub niemożliwe (pediatria).

Ponadto pobieranie DBS nie wymaga stosowania antykoagulantów, separacji osocza i zmniejsza kontakt z materiałem zakaźnym. Ponadto wysuszone plamki krwi można łatwo przechowywać i transportować do laboratoriów analitycznych bez użycia urządzeń chłodniczych.

Dzięki nowym osiągnięciom w technikach analitycznych (spektrometria mas), które umożliwiają analizę ilościową z bardzo małej objętości krwi. Pobieranie próbek DBS stanowi potężne narzędzie do analiz biomedycznych, szczególnie w badaniach farmakokinetycznych, w których potrzebnych jest kilka próbek krwi, oraz do procedur fenotypowania.