Attività CYP2C9 valutata con una semplice puntura del dito

Gli enzimi del citocromo P450 (CYP) sono il principale sistema enzimatico che metabolizza i farmaci nell'uomo. Una grande variabilità interindividuale influenza l'attività di questi enzimi, e di conseguenza le concentrazioni plasmatiche del farmaco, con conseguenti diversi effetti farmacodinamici e la comparsa di effetti collaterali. I fattori ambientali, la dieta, i farmaci o la genetica sono responsabili di questa variabilità. I fattori genetici sono molto importanti poiché la maggior parte di questi enzimi è altamente polimorfica. Ad esempio, finora sono state scoperte oltre 80 varianti alleliche del CYP2D6 associate all'assenza, alla diminuzione o all'aumento dell'attività enzimatica. La maggior parte dei polimorfismi è stata rilevata da reazioni avverse verificatesi in un gruppo all'interno della popolazione dopo la somministrazione di dosi normali di farmaci. Quei pazienti che manifestavano reazioni avverse spesso avevano una ridotta capacità di metabolizzare alcuni farmaci. Nella terapia clinica, questa variabilità ha conseguenze importanti tra cui la mancanza di risposta a un trattamento e/o reazioni avverse ai farmaci. Al fine di ridurre questi eventi potenzialmente indesiderati che possono portare a gravi reazioni avverse o alla morte, potrebbe quindi essere di interesse decisivo poter valutare l'attività di questi enzimi a livello individuale. Possono essere utilizzati due approcci per valutare le attività dei CYP, il genotipo e il fenotipo. Il genotipo si basa sull'analisi del DNA e sul rilevamento del polimorfismo. Il fenotipo consiste nella somministrazione di un farmaco "modello" o di un farmaco sonda metabolizzato da uno specifico CYP e nella determinazione di un rapporto tra il farmaco e il suo metabolita nel plasma o nelle urine. Il principale svantaggio dei metodi di fenotipizzazione è la raccolta delle urine durante la notte o almeno 8 ore dopo la somministrazione del test della sonda. Questa procedura è molto noiosa e richiede tempo sia per il paziente che per il personale medico. Il test può essere eseguito su plasma o sangue 1-2 ore dopo la somministrazione della sonda. Tuttavia, questa procedura è invasiva e necessita di un importante volume di sangue (6 ml). Recentemente, è stato sviluppato un nuovo approccio per la determinazione quantitativa delle concentrazioni di farmaci circolanti utilizzando macchie di sangue essiccato (DBS) su carta da filtro ottenuta con una semplice puntura del dito. A causa del piccolo volume di sangue richiesto (circa 10 µL) rispetto al campionamento convenzionale, questo metodo minimamente invasivo fornisce un'alternativa a misura di paziente per il prelievo di sangue nella popolazione di pazienti in cui il prelievo venoso non è etico o impossibile (pediatria).

Inoltre, il campionamento DBS non richiede l'uso di anticoagulanti, la separazione del plasma e riduce il contatto con materiale infetto. Inoltre, le macchie di sangue essiccato possono essere facilmente conservate e spedite ai laboratori di analisi senza l'utilizzo di dispositivi refrigerati.

Grazie ai nuovi sviluppi delle tecniche analitiche (spettrometria di massa), che consentono l'analisi quantitativa da piccolissimi volumi di sangue. Il campionamento DBS rappresenta un potente strumento per le analisi biomediche, in particolare negli studi di farmacocinetica in cui sono necessari numerosi campioni di sangue e per le procedure di fenotipizzazione.