Rola IL-17 w wariantach łuszczycy

Zrekrutowanych zostanie łącznie 80 osób z łuszczycą niestosujących obecnie leczenia systemowego, z co najmniej jedną blaszką łuszczycową na tułowiu lub proksymalnych częściach kończyn oraz mających dodatkowo bardziej oporne na leczenie obszary łuszczycy. Osoby te zostaną sklasyfikowane w następujących 5 grupach w zależności od lokalizacji obszarów opornych: łuszczyca owłosionej skóry głowy (20 osób), łuszczyca krostkowa dłoni i stóp (10 osób), łuszczyca niekrostkowa dłoni i stóp (10 osób), łuszczyca łokcia (10 osób). 20 osób) i łuszczycy podudzi (20 osób).

Podczas wizyty w dniu 0 nasilenie łuszczycy zostanie ocenione przy użyciu powierzchni ciała (BSA) oraz wskaźnika obszaru i ciężkości łuszczycy (PASI).

Po odpowiednich okresach wypłukiwania u wszystkich 80 osób zostaną wykonane dwie biopsje skóry: jedna z blaszki zlokalizowanej na tułowiu lub proksymalnych kończynach oraz jedna z blaszki zlokalizowanej w obszarze bardziej opornym na leczenie (skóra głowy, dłonie/podeszwy stóp, łokieć lub podudzie). . Każda biopsja zostanie podzielona na pół. Jedna część zostanie wykorzystana do ograniczonego panelu immunohistochemicznego, a dodatkowe barwienie zostanie przeprowadzone na próbkach pobranych od pacjentów z łuszczycą krostkową dłoni i stóp oraz łuszczycą dłoni i stóp bez zmian krostkowych w celu zlokalizowania komórek wytwarzających IL-17A i IL-23. Druga połowa zostanie wykorzystana do analizy ekspresji genów przy użyciu reakcji łańcuchowej polimerazy z odwrotną transkrypcją (RT-PCR) dla wszystkich pacjentów, w tym następujących genów: IL-23 (p40 i p19), IL-17A i ludzkie kwaśne białko rybosomalne (HARP) ). Ponadto ekspresja innych określonych genów będących przedmiotem zainteresowania zostanie przeanalizowana przy użyciu RT-PCR u pacjentów z łuszczycą krostkową dłoni i stóp oraz nie-krostkową łuszczycą dłoni i stóp. Ponadto od 10 zdrowych ochotników zostaną pobrane cztery biopsje skóry do RT-PCR (IL-23 (p40 i p19), IL-17A i HARP). Jedna biopsja zostanie pobrana z tułowia, a druga z dłoni lub podeszwy. Trzecia i czwarta biopsja zostanie pobrana z dodatkowych obszarów (skóry głowy, łokcia lub kończyny dolnej). Ekspresja genów w blaszkach z obszarów bardziej opornych na leczenie (skóra głowy, dłonie, łokcie, podudzia) zostanie porównana z ekspresją genów w blaszkach z tułowia lub innych okolic kończyn górnych i dolnych.

W sumie 30 z 80 pacjentów będzie miało również jedną lub dwie dodatkowe biopsje skóry. U 10 pacjentów z łuszczycą krostkową dłoni i stóp oraz u 10 pacjentów z łuszczycą dłoni i stóp bez zmian krostkowych zostanie wykonana jedna dodatkowa biopsja zmienionej chorobowo skóry dłoni i jedna biopsja płytki na tułowiu lub kończynach w celu wyizolowania i analizy komórek w celu zbadanie mechanizmów związanych ze zwiększoną ekspresją IL-17A bez jednoczesnego wzrostu IL-23. Dziesięciu pacjentów z łuszczycą zwykłą na tułowiu lub kończynach górnych, ale bez krostkowej lub niekrostkowej łuszczycy dłoniowo-podeszwowej, będzie miało dodatkowo wykonaną biopsję zmienionej skóry. Po ekstrakcji komórek zapalnych, do badania IL-17A i IL-23 w komórkach T, granulocytach/mastocytach/makrofagach i komórkach prezentujących Ag zostanie wykorzystana cytometria przepływowa łącząca markery powierzchniowe komórek i barwienie wewnątrz cytoplazmy. Jeśli zebrana zostanie wystarczająca liczba komórek, za pomocą cytometrii przepływowej zostaną przeanalizowane trzy panele przeciwciał w następującej kolejności: panel komórek T, panel granulocytów/mastocytów/makrofagów i panel komórek prezentujących antygen (APC). Wszystkie panele należy również ocenić za pomocą przeciwciała anty-CD45 (klaster różnicowania) i testu żywotności (Aqua żywy/martwy). Wyniki cytometrii przepływowej zostaną porównane dla biopsji dłoni osób z łuszczycą dłoniowo-podeszwową krostkową i niekrostkową, tułowia lub bliższych kończyn osób z łuszczycą krostkową i niekrostkową dłoniowo-podeszwową oraz tułowia lub bliższych kończyn osób z łuszczycą zwykłą .

Wszystkie biopsje skóry zostaną wykonane podczas wizyty w dniu 0, a jeśli konieczne będzie usunięcie szwów z biopsji skóry, zostanie przeprowadzona opcjonalna wizyta badawcza (dzień 10).

Ponadto poziomy krążącej IL-17A w osoczu będą mierzone u wszystkich osobników i zdrowych ochotników w celu porównania poziomów IL-17A w 5 grupach osobników z łuszczycą i zdrowych osobników. Ponadto zbadana zostanie korelacja między poziomami IL-17A a PASI.