Opracowanie biomarkera do monitorowania wyników klinicznych u dzieci z tłuszczakiem kręgosłupa.

Badanie kliniczne mające na celu poszukiwanie biomarkerów metabolicznych wykrywalnych za pomocą spektrometrii mas, które można wykorzystać do „stratyfikacji” pacjentów z bezobjawowym tłuszczakiem. Biorąc pod uwagę często rozległy charakter tłuszczaków związanych z dolnym rdzeniem kręgowym, stawiamy hipotezę, że składniki lipidowe lub pochodzące z nich metabolity mogą dostać się do krwioobiegu dziecka. Bardziej naciekowe tłuszczaki niosą ze sobą większe ryzyko pogorszenia objawów i, jak twierdzimy, powinny mieć również większą szansę na wygenerowanie „sygnatury” lipidów we krwi i / lub moczu. Faza 1 - Próbki płynu mózgowo-rdzeniowego, krwi i moczu będą pobierane od pacjentów z tłuszczakiem rdzenia poddawanych operacji (n = 3 do 5). Świadoma zgoda, po zatwierdzeniu przez odpowiednią komisję etyczną, zostanie wdrożona. Krew i mocz zostaną pobrane przed operacją, a śródoperacyjnie zostaną pobrane próbki płynu mózgowo-rdzeniowego. Analiza spektrometrii mas pozwoli zidentyfikować gatunki lipidów obecne w płynie mózgowo-rdzeniowym tych pacjentów oraz stopień, w jakim są one również wykrywalne we krwi i/lub moczu pacjenta. Wszelkie gatunki lipidów wykryte zarówno w płynie mózgowo-rdzeniowym, jak i we krwi/moczu będą stanowić potencjalne biomarkery i będą przedmiotem zainteresowania następnej fazy badań. Faza 2 następnie oceni wartość dyskryminacyjną tych potencjalnych biomarkerów, porównując ich profile we krwi i/lub moczu z trzech grup klinicznych: (i) Pacjenci z tłuszczakami kręgosłupa, którzy mają objawy neurologiczne i zgłaszają się do szpitala na operację (tj. podobnych pacjentów jak w fazie 1). Próbki krwi/moczu zostaną pobrane przed operacją, aby reprezentować grupę „wysokiego ryzyka”. (ii) Pacjenci z tłuszczakami kręgosłupa, którzy pozostali bezobjawowi po kilkuletniej obserwacji.

Reprezentują one grupę „niskiego ryzyka”; (iii) Pacjenci ze schorzeniami kręgosłupa bez tłuszczaka. Reprezentują one naszą „negatywną” grupę kontrolną. Liczebność grup zostanie określona za pomocą obliczeń mocy z wykorzystaniem danych wariancji z pomiarów pacjentów w fazie 1. Analiza statystyczna zostanie przeprowadzona za pomocą jednoczynnikowej analizy ANOVA lub nieparametrycznego odpowiednika w celu sprawdzenia znaczących różnic między trzema grupami. Spektrometria mas (Rysunek 2) zostanie wykonana w Centrum Proteomiki, Metabolomiki i Lipidomiki Instytutu Zdrowia Dziecka z wykorzystaniem nano ultrasprawnej chromatografii cieczowej i ultrasprawnej chromatografii konwergencji - kwadrupolowej spektrometrii mas czasu przelotu, nowej technologii spektralnej mas do lipidomiki i metabolomiki analiza. Ultrawydajna chromatografia konwergencji to technologia chromatografii wykorzystująca jako fazę ruchomą dwutlenek węgla obecny w stanie płynu nadkrytycznego i umożliwiająca frakcjonowanie metabolitów i lipidów zgodnie z ich klasą, a nie hydrofobowością. Umożliwia ilościowe oznaczenie wszystkich głównych klas lipidów obecnych w tkance, w tym fosfolipidów, wolnych kwasów tłuszczowych, estryfikowanych kwasów tłuszczowych, estrów cholesterolu i steroli. Cząsteczki nielipidowe (np. cholina) może również wykazywać zmienioną obfitość u pacjentów z tłuszczakiem, dlatego też zostanie podjęta bardziej ogólna analiza metabolomiczna, jeśli czas na to pozwoli.