Vývoj biomarkeru pro sledování klinických výsledků u dětí se spinálním lipoomem.

Klinická studie k hledání metabolických biomarkerů detekovatelných hmotnostní spektrometrií, které lze použít ke „stratifikaci“ pacientů s asymptomatickým lipomem. Vzhledem k často rozsáhlé povaze lipomů spojených s nízkou míchou předpokládáme, že lipidové složky nebo z nich odvozené metabolity se mohou dostat do krevního řečiště dítěte. Více infiltrativní lipomy s sebou nesou vyšší riziko symptomatického zhoršení a, jak tvrdíme, by také měly mít vyšší šanci na vytvoření „podpisu“ lipidů v krvi a/nebo moči. Fáze 1 - Vzorky mozkomíšního moku, krve a moči budou odebrány pacientům s lipomem páteře podstupujícím operaci (n = 3 až 5). Po schválení příslušnou etickou komisí bude implementován informovaný souhlas. Předoperačně budou odebrány vzorky krve a moči a budou odebrány intraoperační vzorky mozkomíšního moku. Analýza hmotnostní spektrometrií identifikuje druhy lipidů přítomné v mozkomíšním moku těchto pacientů a rozsah, v jakém jsou detekovatelné také v krvi a/nebo moči pacienta. Jakékoli druhy lipidů detekované jak v mozkomíšním moku, tak v krvi/moči budou představovat potenciální biomarkery a budou tvořit těžiště další fáze studie. Fáze 2 pak vyhodnotí diskriminační hodnotu těchto potenciálních biomarkerů porovnáním jejich profilů v krvi a/nebo moči ze tří klinických skupin: (i) Pacienti s spinálními lipomy, kteří mají neurologické symptomy/příznaky a navštěvují nemocnici kvůli operaci (tj. podobní pacienti jako ve fázi 1). Vzorky krve/moči budou odebrány předoperačně, aby reprezentovaly „vysoce rizikovou“ skupinu. (ii) Pacienti s spinálními lipomy, kteří zůstali asymptomatičtí po několika letech sledování.

Tito představují skupinu „nízkého rizika“; (iii) Pacienti s onemocněním páteře nezahrnujícím lipom. Ty představují naši „negativní“ kontrolní skupinu. Velikosti skupin budou určeny výpočtem síly s použitím údajů o rozptylu z měření pacientů ve fázi 1. Statistická analýza bude provedena jednocestnou ANOVA nebo neparametrickým ekvivalentem, aby se otestovaly významné rozdíly mezi těmito třemi skupinami. Hmotnostní spektrometrie (obrázek 2) bude prováděna v Ústavu dětského zdraví Centrum pro proteomiku, metabolomiku a lipidomiku pomocí nano ultraúčinné kapalinové chromatografie a ultraúčinné konvergenční chromatografie - kvadrupólové hmotnostní spektrometrie s dobou letu, nové hmotnostní spektrální technologie pro lipidomickou a metabolomickou analýza. Ultravýkonná konvergenční chromatografie je chromatografická technologie, která využívá oxid uhličitý přítomný v superkritickém tekutém stavu jako mobilní fázi a umožňuje frakcionaci metabolitů a lipidů podle jejich třídy a nikoli podle hydrofobnosti. Umožňuje kvantifikaci všech hlavních tříd lipidů přítomných v tkáni včetně fosfolipidů, volných mastných kyselin, esterifikovaných mastných kyselin, esterů cholesterolu a sterolů. Nelipidové molekuly (např. cholin) může také vykazovat změněnou hojnost u pacientů s lipomem, a proto bude také provedena obecnější metabolomická analýza, pokud to čas dovolí.