Modyfikacje mikrośrodowiska węzłów chłonnych u pacjentów z CLL leczonych schematami opartymi na wenetoklaksie (LymBIO)

Komórki jednojądrzaste LN, PB i BM pobrane od pacjentów z PBL w określonych punktach czasowych zostaną przetestowane przez:

• Wysokowydajny test leków ex vivo (platformy 2D)
• Globalna analiza transkryptomu przez sekwencjonowanie RNA
• Cytometria przepływowa, w tym markery aktywacji i adhezji/migracji, m.in. CD69, CD80, CD86, HLA-DR, CD38, CD49d, CXCR4;
• Testy fosfo-flow, do oceny stanu fosforylacji białek zaangażowanych w transdukcję sygnalizacji BCR, m.in. AKT i ERK;
• Western blot lizatów jądrowych i cytoplazmatycznych frakcji białkowych w celu walidacji ekspresji odpowiednich genów
• Ukierunkowane głębokie sekwencjonowanie przez wcześniej zweryfikowany panel

Ocena minimalnej choroby resztkowej zostanie przeprowadzona przez:

• 6-kolorowa cytometria przepływowa
• NGS CfDNA będzie analizowane przez ukierunkowane NGS.

Następujące cechy zostaną ocenione za pomocą dostosowanego USG:

Powierzchowne miejsca węzłowe (sonda liniowa 7,5 MHz):

• Strona
• Rozmiar: długa i krótka średnica (czułość <5 mm)
• Kształt
• Granica
• echostruktura kory mózgowej; ocena ewentualnej siateczki wewnątrzwęzłowej
• Echogeniczny opis wnęki: obecność, brak i nieregularna echomorfologia

Opcjonalne parametry:

• Ocena dopplerowska: dystrybucja naczyniowa, opór naczyniowy
• Ultrasonografia ze wzmocnieniem kontrastowym (CEUS): sonda liniowa 7,5 MHz (opcjonalnie); ocena ilościowa za pomocą dedykowanego oprogramowania (krzywe wchodzenia i wymywania): opcja

Głębokie miejsca węzłowe (sonda 3,5-5 MHz):

• Strona
• Obecność/brak głębokich limfoadenopatii
• Rozmiar (czułość <5 mm)
• Echo-struktura kory (tylko jeśli jest powierzchowna, np. biodrowy zewnętrzny LN)

Opcjonalne parametry:

• Wzór naczyniowy za pomocą: kolorowego dopplera, dwuwymiarowego dopplera mocy i MicroV (tylko jeśli powierzchowne, np. biodrowy zewnętrzny LN)
• Ultrasonografia ze wzmocnieniem kontrastowym (CEUS) (opcjonalnie): układ naczyniowy obecny vs nieobecny, intensywność

Śledziona:

• Rozmiar (dedykowane oprogramowanie do dokładniejszego określenia średnicy bipolarnej): w cm
• Pole przekroju poprzecznego w cm2

Opcjonalne parametry:

• Wskaźnik oporu tętnicy śledzionowej
• Przepływ żyły wrotnej (przepływ wrotny do przodu lub do przodu): Vmax („maksymalna prędkość wyrażona w cm” i „średnia prędkość wyrażona w cm”)
• Sztywność śledziony (za pomocą Fibroscan lub fali punktowej lub fali 2D) wyrażona w kPa

Wątroba:

• Rozmiar
• Struktura echa

Opcjonalne parametry:

• Parametry przepływu żyły wrotnej
• Wskaźnik oporu tętnic wątrobowych
• Sztywność wątroby wyrażona w kPa