Biomarkery stresu oksydacyjnego i stanu zapalnego u pacjentów z rakiem krtani leczonych chirurgicznie

Wybór pacjenta

Eksperymentalnym interwencyjnym badaniem prospektywnym objęto 100 pacjentów z rakiem płaskonabłonkowym krtani leczonych operacyjnie w okresie od października 2022 do lutego 2023 roku w ośrodku referencyjnym trzeciego stopnia. Badanie to zostało zatwierdzone przez Institutional Ethics Committee (745/5-22), a wszyscy pacjenci podpisali formularz świadomej zgody przed włączeniem ich do badania. Rozpoznanie raka krtani potwierdzono badaniem klinicznym otorynolaryngologicznym oraz badaniem laryngomikroskopowym krtani z biopsją i badaniem histopatologicznym tkanki. Wykonano dodatkową diagnostykę (RTG klatki piersiowej i tomografię komputerową szyi oraz ultrasonografię jamy brzusznej) w celu określenia stopnia zaawansowania choroby w skali TNM. Badaniem objęto pacjentów we wszystkich stopniach zaawansowania operacyjnego raka krtani (T1-T4, N0-N2), bez wcześniej leczonych nowotworów złośliwych. Kryteria wykluczenia obejmowały nieoperacyjną chorobę nowotworową, obecność przerzutów odległych, wcześniej leczone nowotwory złośliwe, obecność neurologicznych lub innych ciężkich chorób współistniejących, które uniemożliwiają leczenie chirurgiczne, obecność neurologicznych lub innych ciężkich chorób fizycznych i metabolicznych współistniejących, nadużywanie substancji psychoaktywnych oraz niezdolność do wyrażenia świadomej zgody .

O sposobie leczenia każdego pacjenta decydowała zakładowa Rada Onkologiczna (składająca się z radioterapeuty, chirurgów głowy i szyi, onkologa i histopatologa). Otwarte leczenie chirurgiczne polegało na resekcji guza (kordektomia, laryngektomia częściowa lub całkowita) z lub bez jakiejś formy dysekcji szyi w przypadku limfadenopatii szyjnej. Odnotowano charakterystykę demograficzną, kliniczną i histopatologiczną (wiek i płeć, palenie tytoniu, histopatologiczny stopień guza, klasyfikacja TNM i sposób leczenia).

Ocena jakości życia

Kwestionariusz Jakości Życia Chorych na Nowotwory Głowy i Szyi (QLQ – H&N35) posłużył do oceny jakości życia chorych na raka krtani leczonego operacyjnie.

Ocena bólu

Do oceny bólu zastosowano wizualną skalę analogową (VAS). Wyniki zostały oparte na zgłaszanych przez siebie pomiarach nasilenia bólu, które są rejestrowane za pomocą znaku umieszczonego w jednym punkcie wzdłuż 10-centymetrowej linii, która reprezentuje kontinuum między dwoma końcami skali (0 cm na lewym końcu skali). podziałka oznacza „brak bólu”, a 10 cm na prawym końcu skali oznacza „ból najgorszy”).

Do oceny jakości bólu pooperacyjnego wykorzystano kwestionariusz Brief Pain Inventory, Diagnosing Neuropathic Pain 4 (DN4) oraz Pain Detect Questionnaire

Analgezja pooperacyjna

Monitorowano rodzaj i zużycie leków przeciwbólowych stosowanych po zabiegu. Leki przeciwbólowe stosowano zgodnie z drabiną WHO: (1) w przypadku bólu od łagodnego do umiarkowanego, nieopioidowy (acetaminofen lub niesteroidowy lek przeciwzapalny, NLPZ) z adiuwantem lub bez; (2) na umiarkowany lub silny ból, nieopioidowy z opioidem na umiarkowany ból i (3) opioid na umiarkowany lub silny ból nie połączony z innym środkiem.

Pomiar stresu oksydacyjnego i parametrów zapalnych

Od pacjentów pobierano krew do analizy parametrów stresu oksydacyjnego i parametrów stanu zapalnego przed leczeniem operacyjnym i po leczeniu operacyjnym (1-2 doba pooperacyjna i 9-10 doba pooperacyjna). Stężenia interleukiny 1 (IL-1) i 6 (IL-6), peroksydazy glutationowej 1 (GPX1), dysmutazy ponadtlenkowej 1 (SOD1) i dialdehydu malonowego (MDA) w surowicy określono za pomocą powlekanego testu immunoenzymatycznego (ELISA) ) zestawy, zgodnie z zaleceniami producenta (Elabscience, Wuhan, Chiny). Zestawy ELISA do oznaczania stężeń IL-1 i IL-6 były oparte na zasadzie Sandwich ELISA, z płytkami wstępnie opłaszczonymi przeciwciałem specyficznym dla ludzkich cytokin. Gęstość optyczną (OD) mierzono spektrofotometrycznie przy 450 nm, stosując czytnik płytek Multiskan EX (Thermo Fisher Scientific, Vantaa, Finlandia). Stężenie analitezyny w badanych próbkach obliczono porównując OD próbek z krzywą wzorcową utworzoną za pomocą oprogramowania GraphPad Prism 9.0 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA).

Analiza statystyczna

Dane kategoryczne zostały opisane za pomocą liczb bezwzględnych i względnych (w procentach), natomiast dane liczbowe podano jako średnią arytmetyczną i odchylenie standardowe lub medianę i rozstęp międzykwartylowy (IQR), w zależności od rozkładu danych. Normalność oceniano metodami matematycznymi (Shapiro-Willka, skośność i kurtoza oraz współczynnik zmienności) i graficznymi (histogram, wykres pudełkowy). Do oceny zmian natężenia bólu, parametrów stresu oksydacyjnego oraz biomarkerów stanu zapalnego zastosowano test Friedmana z testem rang Wilcoxona jako metodą testową post-hoc. Do analizy związku między natężeniem bólu (VAS), parametrami stresu oksydacyjnego a biomarkerami stanu zapalnego wykorzystano współczynnik korelacji rang Spearmana, ponieważ zmienne nie miały rozkładu normalnego. W celu oceny wszystkich możliwych czynników wpływających na poziom stresu oksydacyjnego wyrażonego jako poziomy SOD i MDA przeprowadzono analizę regresji liniowej (metoda enter) podając współczynnik regresji B, 95% poziom ufności (CI) dla B oraz wartość p. Najpierw przeprowadzono analizę jednowymiarową, a wszystkie istotne czynniki połączono w modele wielowymiarowe. Wszystkie metody statystyczne uznano za istotne, jeśli wartość p była mniejsza lub równa 0,05. Analizę przeprowadzono w programie IBM SPSS ver. 26.