Estudo Clínico de Microquimerismo e cfDNA como Biomarcadores para Rejeição Aguda Após Transplante de Órgãos (CSMCDTITAROT)

Atualmente, o transplante de órgãos tornou-se uma terapia eficaz para pacientes com falência de órgãos em estágio terminal. Desde o lançamento do piloto de doação voluntária de órgãos após a morte de cidadãos em 2010, a doação voluntária de órgãos tornou-se a única fonte legítima de transplantes de órgãos em 2015, e a transição de depender dos canais judiciais para obter os órgãos para a doação voluntária de cidadãos foi foram alcançados com sucesso na China, os casos de doação e o número aumentaram ano a ano. Atualmente, o número anual de transplantes de órgãos na China ultrapassa 10.000 casos, dos quais o transplante de rim e o transplante de fígado lideram, respectivamente com mais de 5.000 casos e 2.000 casos.

A rejeição ainda é a causa mais comum de disfunção precoce após o transplante de órgãos, e a incompatibilidade dos principais antígenos de histocompatibilidade (MHC, MHC humano, também conhecido como HLA) do doador e do receptor é a principal causa de rejeição após o transplante. Portanto, a importância da compatibilidade no transplante de órgãos tem sido amplamente aceita. A tipagem HLA e a digitação HLA de alta resolução estão se tornando cada vez mais comuns. Ao mesmo tempo, a mais recente pesquisa internacional mostra que a tipagem HLA de baixa resolução no transplante de órgãos também pode causar rejeição significativa, enquanto a tipagem HLA de alta resolução, a tendência futura, pode melhorar a taxa de sobrevivência geral. Além disso, o sequenciamento de alto rendimento NGS levará a classificação de alta resolução HLA a um novo patamar.

Além da correspondência de HLA, os receptores podem estabelecer tolerância imunológica específica aos enxertos de doadores, o que afetará significativamente a sobrevivência a longo prazo após a operação. Um grande número de dados experimentais e clínicos sugeriram que a formação de microquimerismo pode facilitar com sucesso a tolerância imunológica específica do doador após o transplante. Quimera refere-se à condição das células do doador e do receptor coexistirem e se moverem umas para as outras, pois as células do doador existem no corpo do receptor após receber o transplante de aloenxerto ou xenoenxerto e as células do receptor também existem no enxerto. Entre eles, a microquimera refere-se aos baixos níveis de células doadoras (geralmente menos de 0,01%) na circulação sanguínea periférica de receptores de transplante, o que é comumente visto em pacientes com transplante de órgãos sólidos. O conceito de microquimerismo foi proposto pela primeira vez por Thomas Starzl na Escola de Medicina da Universidade de Pittsburgh na década de 1990, que apontou que entre o microquimerismo e a tolerância imunológica ao transplante existe uma possível relação de causa e efeito. A presença prolongada de microquimerismo pode levar à tolerância do receptor ao órgão doador. Quanto mais células transeuntes o órgão tiver, mais células ele desloca, facilitando a formação de tolerância ao transplante, o que explica o fenômeno da rejeição mais branda após o transplante de fígado.

Vários métodos foram encontrados para induzir o microquimerismo, incluindo transfusão específica do doador, infusão de células da medula óssea do doador, infusão de leucócitos do doador, fatia do baço combinada com transplante de órgãos e assim por diante.

A formação de microquimerismo é provavelmente um dos mecanismos de sobrevivência a longo prazo do enxerto transplantado, e a detecção de microquimerismo após o transplante pode efetivamente prever a tolerância imunológica e a rejeição do enxerto, embora não haja um método de quantificação muito eficaz. Além disso, a relação entre microquimerismo e imunotolerância permanece questionável, como em que nível de formação de microquimerismo clínico sugere tolerância imunológica estável, e se é possível determinar a retirada de imunossupressores pela detecção de microquimerismo e etc., estes são problemas urgentes que ficaram por resolver e esclarecer. Com base no local de exclusão de inserção (InDel) combinado com reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real, a sensibilidade de detecção pode atingir 0,001% a 0,01%, o que pode quantificar com precisão o nível de microquimerismo e monitorar dinamicamente o microquimerismo após o transplante.

Ao mesmo tempo, cientistas da Universidade de Stanford, nos Estados Unidos, continuaram relatando em 2014 e 2015 que o uso de uma nova geração de tecnologia de sequenciamento de alto rendimento (NGS) para detectar o nível de DNA livre de células derivadas de doadores (cf DNA) no sangue plasma de receptores após transplante cardíaco e pulmonar. Os investigadores descobriram que o nível de DNA cf derivado do doador aumentou significativamente quando ocorre rejeição aguda ou crônica, portanto, pode ser usado como um marcador para refletir a rejeição ou lesão do enxerto.

Foi relatado que os níveis de microquimerização e doador-cfDNA estão correlacionados com a rejeição após o transplante de órgãos, mas esses estudos são baseados principalmente em um pequeno número de casos e cujos resultados são qualitativos ou com baixo valor de resolução devido a técnicas de detecção limitadas, portanto, podem não fornecem uma taxa específica de microquimerismo.

Portanto, os investigadores precisam esclarecer o papel do microquimerismo e o nível de DNA cf derivado do doador durante a lesão do enxerto, bem como a rejeição após o transplante, usando uma nova geração de tecnologia de detecção para estudo multicêntrico com grande tamanho de amostra.

Neste estudo, serão recrutados e detectados 950 casos de transplante de órgãos, dos quais 600 casos de transplante renal, 300 casos de transplante hepático e 50 casos de transplante pulmonar. Serão coletados 8 ml de sangue periférico em 1 tubo com anticoagulação EDTA. Os momentos da coleta são os seguintes: Os pacientes com tratamento de rotina após o transplante são realizados uma vez por semana durante 1 mês e depois aos 3, 6 e 12 meses após o transplante. Em caso de rejeição aguda, o sangue adicional será coletado uma vez no dia do diagnóstico e uma vez após 7 dias de remissão do tratamento. Todas as amostras foram detectadas para microquimerismo e cfDNA.