Klinisk undersøgelse af mikrokimerisme og cfDNA som biomarkører for akut afstødning efter organtransplantation (CSMCDTITAROT)

Organtransplantation er blevet en effektiv terapi for patienter med organsvigt i slutstadiet på nuværende tidspunkt. Siden lanceringen af ​​pilot frivillig organdonation efter borgernes død i 2010, er den frivillige organdonation blevet den eneste legitime kilde til organtransplantationer i 2015, og overgangen fra at stole på de retlige kanaler for at få organerne til frivillig donation af borgere har blevet opnået med succes i Kina, donationssager og antallet steg år for år. På nuværende tidspunkt har det årlige antal organtransplantationer i Kina oversteget 10.000 tilfælde, hvoraf nyretransplantation og levertransplantation var i spidsen, henholdsvis med mere end 5000 tilfælde og 2000 tilfælde.

Afstødning er stadig den mest almindelige årsag til tidlig dysfunktion efter organtransplantation, og mismatching af store histokompatibilitetsantigener (MHC, human MHC, også kendt som HLA) hos donor og modtager er den væsentligste årsag til afstødning efter transplantation. Derfor er vigtigheden af ​​matchning i organtransplantation blevet bredt accepteret. HLA-typeskrivning og HLA-typeskrivning i høj opløsning bliver mere og mere almindeligt. Samtidig viser den seneste internationale forskning, at lavopløsnings-HLA-typning ved organtransplantation også kan forårsage betydelig afstødning, mens HLA-højopløsnings-typning, den fremtidige trend, kan forbedre den samlede overlevelsesrate. Ydermere vil NGS high-throughput sekventering skubbe HLA højopløsningsklassificering til en ny højde.

Udover HLA-matching kan modtagerne opsætte specifik immuntolerance over for donortransplantater, hvilket vil påvirke langtidsoverlevelsen efter operationen betydeligt. Et stort antal eksperimentelle og kliniske data har antydet, at dannelsen af ​​mikrokimerisme med succes kan lette donorspecifik immuntolerance efter transplantation. Chimera refererer til tilstanden af ​​cellerne fra donoren og fra modtageren sameksisterer og flytter til hinanden, da donorcellerne eksisterer i modtagerkroppen efter at have modtaget allotransplantatet eller xenotransplantatet, og modtagercellerne eksisterer også i transplantatet. Blandt dem refererer mikrokimærer til de lave niveauer af donorceller (sædvanligvis mindre end 0,01%) i den perifere blodcirkulation hos transplanterede, som almindeligvis ses hos patienter med solid organtransplantation. Begrebet mikrokimerisme blev først foreslået af Thomas Starzl i Medicine School of University of Pittsburgh i 1990'erne, som påpegede, at der mellem mikrokimerisme og transplantatimmuntolerance ligger en mulig årsag og virkning sammenhæng. Den langvarige tilstedeværelse af mikrokimerisme kan føre til modtagerens tolerance over for donororganet. Jo flere forbipasserende celler organet har, jo flere celler flytter det ud, hvilket gør det lettere at danne transplantationstolerance, hvilket forklarer fænomenet med den mildeste afstødning efter levertransplantation.

Adskillige metoder har vist sig at inducere mikrokimerisme, herunder donorspecifik transfusion, donorknoglemarvscelleinfusion, donorleukocytinfusion, miltskive kombineret med organtransplantation og så videre.

Dannelsen af ​​mikrokimerisme er sandsynligvis en af ​​de langsigtede overlevelsesmekanismer for det transplanterede transplantat, og påvisningen af ​​mikrokimerisme efter transplantation kan effektivt forudsige transplantatets immuntolerance og afstødning, mens der ikke er nogen særlig effektiv kvantificeringsmetode. Derudover er forholdet mellem mikrokimerisme og immuntolerance stadig tvivlsomt, såsom til hvilket niveau af den kliniske mikrokimerisme, der tyder på stabil immuntolerance, og om det er muligt at bestemme tilbagetrækningen af ​​immunosuppressive midler ved påvisning af mikrokimerisme osv. er presserende problemer, der mangler at blive løst og afklaret. Baseret på InDel-stedet (Insertion Deletion) kombineret med kvantitativ polymerasekædereaktion i realtid kan detektionsfølsomheden nå 0,001 % til 0,01 %, hvilket nøjagtigt kan kvantificere mikrokimerismeniveauet og dynamisk overvåge mikrokimerisme efter transplantationen.

Samtidig fortsatte forskere fra Stanford University i USA med at rapportere i 2014 og 2015, at brug af en ny generation af high-throughput sekventeringsteknologi (NGS) til at påvise niveauet af donorafledt cellefrit DNA (cf DNA) i blodet plasma fra modtagere efter hjerte- og lungetransplantation. Efterforskerne fandt ud af, at niveauet af donor-afledt cf-DNA var signifikant øget, når akut eller kronisk afstødning sker, og det kunne derfor bruges som en markør til at afspejle afstødning eller transplantatskade.

Det er blevet rapporteret, at mikrokimerisering og donor-cfDNA-niveauer er korreleret med afstødning efter organtransplantation, men disse undersøgelser er for det meste baseret på et lille antal tilfælde, og hvis resultater er kvalitative eller med lav opløsningsværdi på grund af begrænsede detektionsteknikker. ikke give en specifik mikrokimerismehastighed.

Derfor er efterforskerne nødt til at afklare rollen af ​​mikrokimerisme og niveauet af donor-afledt cf DNA under transplantatskade samt afstødning efter transplantation ved hjælp af en ny generation af detektionsteknologi til multi-center undersøgelse med stor prøvestørrelse.

I denne undersøgelse vil 950 tilfælde af organtransplantation, heraf 600 tilfælde af nyretransplantation, 300 tilfælde af levertransplantation og 50 tilfælde af lungetransplantation blive rekrutteret og opdaget. 8 ml perifert blod vil blive opsamlet i 1 rør med EDTA-antikoagulation. Tidspunkterne for indsamlingen er som følger: Patienter med rutinemæssig behandling efter transplantation præformes en gang om ugen i 1 måned og derefter 3, 6 og 12 måneder efter transplantation. I tilfælde af akut afstødning vil det ekstra blod blive indsamlet én gang på diagnosedagen og én gang efter 7 dages behandlingsremission. Alle prøverne blev påvist for mikrokimerisme og cfDNA.