Klinische studie van microchimerisme en cfDNA als biomarkers voor acute afstoting na orgaantransplantatie (CSMCDTITAROT)

Orgaantransplantatie is momenteel een effectieve therapie geworden voor patiënten met eindstadium orgaanfalen. Sinds de start van het proefproject met vrijwillige orgaandonatie na overlijden van burgers in 2010, is vrijwillige orgaandonatie in 2015 de enige legitieme bron van orgaantransplantaties geworden, en de overgang van een beroep op de gerechtelijke kanalen om de organen te verkrijgen naar vrijwillige donatie van burgers heeft met succes bereikt in China, donatiegevallen en het aantal nam jaar na jaar toe. Op dit moment overschrijdt het jaarlijkse aantal orgaantransplantaties in China de 10.000 gevallen, waarvan niertransplantatie en levertransplantatie de leiding hadden, respectievelijk met meer dan 5000 gevallen en 2000 gevallen.

Afstoting is nog steeds de meest voorkomende oorzaak van vroege disfunctie na orgaantransplantatie, en het niet overeenkomen van belangrijke histocompatibiliteitsantigenen (MHC, humaan MHC, ook bekend als HLA) van de donor en ontvanger is de belangrijkste oorzaak van afstoting na transplantatie. Daarom is het belang van matching bij orgaantransplantatie algemeen aanvaard. HLA-typen en HLA-typen met hoge resolutie komen steeds vaker voor. Tegelijkertijd toont het meest recente internationale onderzoek aan dat HLA-typering met lage resolutie bij orgaantransplantatie ook significante afstoting kan veroorzaken, terwijl HLA-typering met hoge resolutie, de toekomstige trend, de algehele overlevingskans kan verbeteren. Bovendien zal NGS high-throughput sequencing de HLA-classificatie met hoge resolutie naar een nieuw niveau tillen.

Naast HLA-matching kunnen ontvangers een specifieke immuuntolerantie instellen voor donortransplantaten, wat de overleving op lange termijn na een operatie aanzienlijk zal beïnvloeden. Een groot aantal experimentele en klinische gegevens hebben gesuggereerd dat de vorming van microchimerisme met succes donorspecifieke immuuntolerantie na transplantatie kan vergemakkelijken. Chimera verwijst naar de toestand van de cellen van de donor en van de ontvanger die naast elkaar bestaan ​​en naar elkaar toe bewegen, aangezien de donorcellen in het ontvangende lichaam bestaan ​​na ontvangst van de allograft- of xenograft-transplantatie en de ontvangende cellen ook in het transplantaat voorkomen. Onder hen verwijst microchimera naar de lage niveaus van donorcellen (meestal minder dan 0,01%) in de perifere bloedcirculatie van ontvangers van transplantaties, wat vaak wordt gezien bij patiënten met een solide-orgaantransplantatie. Het concept van microchimerisme werd voor het eerst voorgesteld door Thomas Starzl in de Medicine School van de Universiteit van Pittsburgh in de jaren 1990, die erop wees dat tussen microchimerisme en transplantatie immuuntolerantie een mogelijke oorzaak en gevolg relatie ligt. De langdurige aanwezigheid van microchimerisme kan leiden tot tolerantie van de ontvanger voor het donororgaan. Hoe meer passantencellen het orgaan heeft, hoe meer cellen het naar buiten schuift, waardoor het gemakkelijker wordt om transplantatietolerantie te vormen, wat het fenomeen van de mildste afstoting na levertransplantatie verklaart.

Er zijn verschillende methoden gevonden om microchimerisme te induceren, waaronder donorspecifieke transfusie, donorbeenmergcelinfusie, donorleukocyteninfusie, miltplak gecombineerd met orgaantransplantatie enzovoort.

De vorming van microchimerisme is waarschijnlijk een van de langetermijnoverlevingsmechanismen van het getransplanteerde transplantaat, en de detectie van microchimerisme na transplantatie kan de immuuntolerantie en afstoting van het transplantaat effectief voorspellen, terwijl er geen erg effectieve kwantificeringsmethode is.. Bovendien blijft de relatie tussen microchimerisme en immunotolerantie twijfelachtig, zoals tot welk niveau van de klinische vorming van microchimerisme een stabiele immuuntolerantie suggereert, en of het mogelijk is om de terugtrekking van immunosuppressieve middelen te bepalen door de detectie van microchimerisme en dergelijke. zijn urgente problemen die nog moeten worden opgelost en opgehelderd. Op basis van de Insertion Deletion (InDel) -site in combinatie met kwantitatieve real-time polymerasekettingreactie, kan de detectiegevoeligheid 0,001% tot 0,01% bereiken, wat het microchimerismeniveau nauwkeurig kan kwantificeren en microchimerisme dynamisch kan volgen na de transplantatie.

Tegelijkertijd bleven wetenschappers van Stanford University in de Verenigde Staten in 2014 en 2015 rapporteren dat het gebruik van een nieuwe generatie high-throughput sequencing-technologie (NGS) om het niveau van donor-afgeleid celvrij DNA (cf. DNA) in bloed te detecteren plasma van ontvangers na hart- en longtransplantatie. De onderzoekers ontdekten dat het niveau van van een donor afkomstig cf-DNA aanzienlijk was verhoogd wanneer acute of chronische afstoting plaatsvond, en dus zou het kunnen worden gebruikt als een marker om afstoting of transplantaatletsel weer te geven.

Er is gemeld dat microchimerisatie en donor-cfDNA-niveaus gecorreleerd zijn met afstoting na orgaantransplantatie, maar deze onderzoeken zijn meestal gebaseerd op een klein aantal gevallen en de resultaten daarvan zijn kwalitatief of met een lage resolutiewaarde vanwege beperkte detectietechnieken. geen specifiek microchimerisme-percentage bieden.

Daarom moeten de onderzoekers de rol van microchimerisme en het niveau van van donor afkomstig cf-DNA tijdens transplantaatletsel en afstoting na transplantatie verduidelijken met behulp van een nieuwe generatie detectietechnologie voor multicenter onderzoek met grote steekproefomvang.

In deze studie zullen 950 gevallen van orgaantransplantatie, waarvan 600 gevallen van niertransplantatie, 300 gevallen van levertransplantatie en 50 gevallen van longtransplantatie worden gerekruteerd en opgespoord. Er wordt 8 ml perifeer bloed opgevangen in 1 buisjes met EDTA-antistolling. De tijdstippen van de verzameling zijn als volgt: Patiënten met een routinebehandeling na transplantatie worden eenmaal per week gedurende 1 maand uitgevoerd en daarna 3, 6 en 12 maanden na transplantatie. In geval van acute afstoting wordt het extra bloed eenmaal afgenomen op de dag van de diagnose en eenmaal na 7 dagen behandelingsremissie. Alle monsters werden gedetecteerd op microchimerisme en cfDNA.