Klinische Studie zu Mikrochimärismus und cfDNA als Biomarker für akute Abstoßung nach Organtransplantation (CSMCDTITAROT)

Die Organtransplantation ist derzeit eine wirksame Therapie für Patienten mit Organversagen im Endstadium. Seit dem Start des Pilotprojekts zur freiwilligen Organspende nach dem Tod von Bürgern im Jahr 2010 ist die freiwillige Organspende zur einzigen legitimen Quelle für Organtransplantationen im Jahr 2015 geworden, und der Übergang von der Berufung auf die gerichtlichen Kanäle zur Beschaffung der Organe zur freiwilligen Spende von Bürgern hat stattgefunden erfolgreich in China erreicht wurden, Spendenfälle und die Zahl stieg von Jahr zu Jahr. Derzeit hat die jährliche Zahl der Organtransplantationen in China 10.000 Fälle überschritten, wobei die Nierentransplantation und die Lebertransplantation mit jeweils mehr als 5.000 Fällen und 2.000 Fällen an der Spitze standen.

Die Abstoßung ist nach wie vor die häufigste Ursache für eine frühe Dysfunktion nach einer Organtransplantation, und die Fehlpaarung der Haupthistokompatibilitätsantigene (MHC, humanes MHC, auch bekannt als HLA) von Spender und Empfänger ist die Hauptursache für eine Abstoßung nach einer Transplantation. Daher ist die Bedeutung des Matchings bei der Organtransplantation weithin anerkannt. HLA-Typisierung und HLA-Typisierung mit hoher Auflösung werden immer häufiger. Gleichzeitig zeigen die neuesten internationalen Forschungsergebnisse, dass die HLA-Typisierung mit niedriger Auflösung bei Organtransplantationen auch zu erheblichen Abstoßungsreaktionen führen kann, während die HLA-Typisierung mit hoher Auflösung, der zukünftige Trend, die Gesamtüberlebensrate verbessern kann. Darüber hinaus wird die NGS-Hochdurchsatzsequenzierung die hochauflösende HLA-Klassifizierung auf ein neues Niveau heben.

Neben dem HLA-Matching können Empfänger eine spezifische Immuntoleranz gegenüber Spendertransplantaten aufbauen, die das Langzeitüberleben nach der Operation erheblich beeinflussen wird. Eine große Anzahl experimenteller und klinischer Daten deutet darauf hin, dass die Mikrochimärismus-Bildung die spenderspezifische Immuntoleranz nach der Transplantation erfolgreich fördern kann. Chimäre bezieht sich auf den Zustand der Zellen des Spenders und des Empfängers, die koexistieren und sich zueinander bewegen, da die Spenderzellen nach Erhalt der Allotransplantat- oder Xenotransplantattransplantation im Körper des Empfängers vorhanden sind und die Empfängerzellen auch im Transplantat vorhanden sind. Unter ihnen bezieht sich Mikrochimäre auf die geringen Mengen an Spenderzellen (normalerweise weniger als 0,01 %) im peripheren Blutkreislauf von Transplantatempfängern, die häufig bei Patienten mit solider Organtransplantation beobachtet werden. Das Konzept des Mikrochimärismus wurde erstmals in den 1990er Jahren von Thomas Starzl an der Medicine School der University of Pittsburgh vorgeschlagen, der darauf hinwies, dass zwischen dem Mikrochimärismus und der Transplantat-Immuntoleranz eine mögliche Ursache-Wirkungs-Beziehung besteht. Das langjährige Vorhandensein von Mikrochimärismus kann zu einer Toleranz des Empfängers gegenüber dem Spenderorgan führen. Je mehr Passantenzellen das Organ hat, desto mehr Zellen schiebt es aus, wodurch sich leichter eine Transplantationstoleranz ausbilden kann, was das Phänomen der leichtesten Abstoßung nach einer Lebertransplantation erklärt.

Es wurden mehrere Methoden gefunden, um Mikrochimärismus zu induzieren, einschließlich Spender-spezifischer Transfusion, Infusion von Spender-Knochenmarkszellen, Infusion von Spender-Leukozyten, Milzschnitt kombiniert mit Organtransplantation und so weiter.

Die Bildung von Mikrochimärismus ist wahrscheinlich einer der langfristigen Überlebensmechanismen des transplantierten Transplantats, und der Nachweis von Mikrochimärismus nach der Transplantation kann die Immuntoleranz und Abstoßung des Transplantats effektiv vorhersagen, während es keine sehr effektive Quantifizierungsmethode gibt. Darüber hinaus bleibt der Zusammenhang zwischen Mikrochimärismus und Immuntoleranz fraglich, etwa bis zu welchem ​​Grad die klinische Mikrochimärismusbildung auf eine stabile Immuntoleranz hindeutet und ob es möglich ist, den Entzug von immunsuppressiven Mitteln durch den Nachweis von Mikrochimärismus usw. zu bestimmen sind dringende Probleme zu lösen und zu klären. Basierend auf der Insertion Deletion (InDel)-Site in Kombination mit einer quantitativen Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktion kann die Nachweisempfindlichkeit 0,001 % bis 0,01 % erreichen, wodurch der Mikrochimärismus-Level genau quantifiziert und der Mikrochimärismus nach der Transplantation dynamisch überwacht werden kann.

Gleichzeitig berichteten Wissenschaftler der Stanford University in den Vereinigten Staaten in den Jahren 2014 und 2015 weiterhin über die Verwendung einer neuen Generation von Hochdurchsatz-Sequenzierungstechnologie (NGS), um den Gehalt an von Spendern stammender zellfreier DNA (vgl. DNA) im Blut nachzuweisen Plasma von Empfängern nach Herz- und Lungentransplantation. Die Forscher fanden heraus, dass die Menge der vom Spender stammenden cf-DNA signifikant erhöht war, wenn eine akute oder chronische Abstoßung auftritt, sodass sie als Marker verwendet werden könnte, um eine Abstoßung oder Transplantatverletzung widerzuspiegeln.

Es wurde berichtet, dass Mikrochimärisierung und Spender-cfDNA-Spiegel mit Abstoßung nach Organtransplantation korrelieren, aber diese Studien basieren meist auf einer kleinen Anzahl von Fällen und deren Ergebnisse sind qualitativ oder mit geringem Auflösungswert aufgrund begrenzter Nachweistechniken liefern keine spezifische Mikrochimärismusrate.

Daher müssen die Ermittler die Rolle des Mikrochimärismus und das Niveau der vom Spender stammenden cf-DNA während der Transplantatverletzung sowie die Abstoßung nach der Transplantation unter Verwendung einer neuen Generation von Nachweistechnologie für multizentrische Studien mit großem Stichprobenumfang klären.

In dieser Studie werden 950 Fälle von Organtransplantationen, davon 600 Fälle von Nierentransplantationen, 300 Fälle von Lebertransplantationen und 50 Fälle von Lungentransplantationen, rekrutiert und erfasst. 8 ml peripheres Blut werden in 1 Röhrchen mit EDTA-Antikoagulation gesammelt. Die Zeitpunkte der Entnahme sind wie folgt: Patienten mit Routinebehandlung nach der Transplantation werden 1 Monat lang einmal wöchentlich und dann 3, 6 und 12 Monate nach der Transplantation vorgeformt. Im Falle einer akuten Abstoßung wird das zusätzliche Blut einmal am Tag der Diagnose und einmal nach 7 Tagen Behandlungsremission entnommen. Alle Proben wurden auf Mikrochimärismus und cfDNA nachgewiesen.