Alterações na Expressão de Proteínas Inflamatórias e Contráteis em Pacientes com Síndrome da Bexiga Dolorosa/CI.

Embora a IC seja reconhecida há mais de um século, sua fisiopatologia permanece um mistério e, como consequência, o tratamento da IC é em grande parte empírico. Vários mecanismos da doença foram postulados, variando de neuroinflamatório a autoimune ou possivelmente agentes infecciosos ou tóxicos. Estudos mais recentes sugeriram uma base genética da doença, mas na maioria das hipóteses um componente inflamatório de algum tipo está envolvido e muitos achados apóiam essa teoria. Uma hipótese frequentemente citada é o epitélio permeável. A bexiga saudável é revestida por uma fina substância mucinosa mucina da superfície da bexiga, que é composta por numerosos glicosaminoglicanos sulfonados e glicoproteínas. Em pacientes com IC, em contraste com os controles, bem como em alguns modelos animais de IC, foram observadas alterações qualitativas nesta camada superficial (Lilly et al, 1990., Moskowitz et al, 1994). Um evento iniciador (toxina) pode levar a alterações funcionais e aumento da permeabilidade. Isso, por sua vez, leva à sensibilização nervosa e possivelmente à regulação positiva. Há evidências crescentes de que a progressão da IC é acompanhada por uma regulação positiva significativa dos nervos sensoriais na bexiga (Letourneau, 1996). O fator de crescimento nervoso (NGF), uma neurotropina que sensibiliza as fibras nociceptivas, foi relatado como aumentado em bexigas de pacientes com CI (Lowe, 1997), e a aplicação de NGF em ratos Wistar induziu hiperatividade aguda da bexiga (Chuang, 2001). Os nervos sensoriais na inflamação neurogênica secretam mediadores inflamatórios como a Substância P (SP), um neurotransmissor nociceptivo no sistema nervoso central e periférico. Quantidades aumentadas da Substância P liberada foram encontradas na urina de pacientes com IC (Hohenfellner, et al, 1992, Pang et al., 1995, Pang et al., 1996), a concentração da Substância P refletindo o grau de dor (Chen et al., 1999). A substância P e as taquiquininas relacionadas (TKs) medeiam uma variedade de processos fisiológicos no trato geniturinário, pulmonar e gastrointestinal por meio da estimulação dos receptores NK1 e NK2. Evidências pré-clínicas obtidas através do uso de antagonistas seletivos dos receptores de taquiquinina indicam que as taquiquininas endógenas estão envolvidas na regulação da contração do músculo liso, vasodilatação, metabolismo da água e inflamação. Recentemente, foi demonstrado que o mRNA que codifica para o receptor SP NK1 está aumentado nas biópsias da bexiga de pacientes com cistite intersticial (Marchand et al., 1998). O mRNA do NK1R foi encontrado no músculo detrusor, urotélio e estruturas vasculares, e o NK1R endotelial estava acentuadamente aumentado. A ligação de SP a NK1R em células endoteliais resulta em vasodilatação, extravasamento de plasma, liberação de citocinas e ativação e infiltração de células imunes, todas características de IC. Experimentos com camundongos NK1R knockout permitiram pela primeira vez demonstrar a necessidade obrigatória de NK1R na cistite e a participação desses receptores na cadeia de eventos que ligam a degranulação dos mastócitos e a inflamação (Saban et al., 2000).

Alterações no sarcolema e expressão alterada dos receptores de taquiquinina e bradicinina podem influenciar significativamente os eventos de sinalização a jusante, levando à propagação dos sintomas de dor pélvica crônica/IC. Ao descobrir a ligação entre os sintomas clínicos e a regulação molecular da resposta inflamatória atípica, podemos oferecer novas e específicas opções de tratamento. Na presente proposta, gostaríamos de aprofundar nossos estudos sobre a patologia da bexiga urinária, em particular o complexo sintomático de PBS/cistite intersticial, e investigar o efeito de alterações no urotélio humano e nas células do músculo detrusor na sinalização mediada por NK1R.

Biópsias de controles e pacientes PBS serão obtidas em anestesia geral ou raquianestesia transuretralmente a partir da cúpula da bexiga e trígono com uma pinça de biópsia. O RNA será extraído e os níveis de expressão dos genes selecionados serão analisados ​​usando PCR em tempo real Taqman e matrizes de expressão gênica (Applied Biosystems). Imagens de cálcio serão usadas para monitorar a ativação do receptor e os níveis de proteína analisados ​​por SDS-PAGE e Western Blotting. A distribuição tecidual dos receptores será analisada por imunocitoquímica.