Cambiamenti nell'espressione proteica infiammatoria e contrattile in pazienti con sindrome della vescica dolorosa/CI.

Sebbene la IC sia stata riconosciuta per più di un secolo, la sua fisiopatologia rimane un mistero e, di conseguenza, il trattamento della IC è in gran parte empirico. È stata postulata una moltitudine di meccanismi della malattia che vanno dal neuroinfiammatorio all'autoimmune o possibilmente agenti infettivi o tossici. Studi più recenti hanno suggerito una base genetica della malattia, ma nella maggior parte delle ipotesi è coinvolta una componente infiammatoria di qualche tipo e molte scoperte supportano questa teoria. Un'ipotesi spesso citata è l'epitelio che perde. La vescica sana è rivestita da una sottile sostanza mucinosa, la mucina superficiale della vescica, che è composta da numerosi glicosaminoglicani solfonati e glicoproteine. Nei pazienti con IC, contrariamente ai controlli, così come in alcuni modelli animali di IC, sono stati osservati cambiamenti qualitativi a questo strato superficiale (Lilly et al, 1990., Moskowitz et al, 1994). Un evento iniziale (tossina) può portare a cambiamenti funzionali e aumento della permeabilità. Questo a sua volta porta alla sensibilizzazione dei nervi e forse alla sovraregolazione. C'è una crescente evidenza che la progressione dell'IC è accompagnata da una significativa sovraregolazione dei nervi sensoriali nella vescica (Letourneau, 1996). È stato riportato che il fattore di crescita nervoso (NGF), una neurotropina che sensibilizza le fibre nocicettrici, è aumentato nelle vesciche dei pazienti con IC (Lowe, 1997) e l'applicazione di NGF nei ratti Wistar ha indotto iperattività della vescica acuta (Chuang, 2001). I nervi sensoriali nell'infiammazione neurogena secernono mediatori infiammatori come la sostanza P (SP), un neurotrasmettitore nocicettivo nel sistema nervoso centrale e periferico. Quantità aumentate della sostanza P rilasciata sono state trovate nelle urine di pazienti con CI (Hohenfellner, et al,1992, Pang et al., 1995, Pang et al., 1996), la concentrazione della sostanza P riflette il grado di dolore (Chen et al., 1999). La sostanza P e le relative tachichinine (TK) mediano una varietà di processi fisiologici nel tratto genito-urinario, polmonare e gastrointestinale attraverso la stimolazione dei recettori NK1 e NK2. L'evidenza preclinica ottenuta mediante l'uso di antagonisti selettivi del recettore della tachichinina indica che le tachichinine endogene sono coinvolte nella regolazione della contrazione della muscolatura liscia, della vasodilatazione, del metabolismo dell'acqua e dell'infiammazione. Recentemente è stato dimostrato che l'mRNA che codifica per il recettore SP NK1 è aumentato nelle biopsie vescicali di pazienti con cistite interstiziale (Marchand et al., 1998). L'mRNA di NK1R è stato trovato nel muscolo detrusore, nell'urotelio e nelle strutture vascolari e l'NK1R endoteliale era notevolmente aumentato. Il legame di SP a NK1R sulle cellule endoteliali provoca vasodilatazione, stravaso plasmatico, rilascio di citochine e attivazione e infiltrazione di cellule immunitarie, tutte caratteristiche dell'IC. Gli esperimenti con i topi knockout NK1R hanno permesso per la prima volta di dimostrare il requisito obbligatorio di NK1R nella cistite e la partecipazione di questi recettori nella catena di eventi che collegano la degranulazione e l'infiammazione dei mastociti (Saban et al., 2000).

I cambiamenti nel sarcolemma e l'espressione alterata dei recettori della tachichinina e della bradichinina potrebbero influenzare in modo significativo gli eventi di segnalazione a valle che portano alla propagazione dei sintomi del dolore pelvico cronico/IC. Scoprendo il legame tra i sintomi clinici e la regolazione molecolare della risposta infiammatoria atipica, potremmo essere in grado di offrire nuove e specifiche opzioni di trattamento. Nell'attuale proposta, vorremmo approfondire i nostri studi sulla patologia della vescica urinaria, in particolare il complesso sintomatico di PBS/cistite interstiziale, e indagare l'effetto dei cambiamenti nell'urotelio umano e nelle cellule muscolari detrusoriali sulla segnalazione mediata da NK1R.

Le biopsie dei controlli e dei pazienti con PBS saranno ottenute in anestesia generale o spinale transuretrale dalla cupola della vescica e dal trigono con una pinza per biopsia. L'RNA sarà estratto ei livelli di espressione dei geni selezionati saranno analizzati mediante Taqman real-time PCR e array di espressione genica (Applied Biosystems). L'imaging del calcio sarà utilizzato per monitorare l'attivazione del recettore ei livelli proteici analizzati mediante SDS-PAGE e Western Blotting. La distribuzione tissutale del recettore sarà analizzata mediante immunocitochimica.