Изменения экспрессии воспалительных и сократительных белков у пациентов с синдромом болезненного мочевого пузыря/ИЦ.

Хотя ИЦ известен уже более века, его патофизиология остается загадкой, и, как следствие, лечение ИЦ в значительной степени эмпирическое. Было постулировано множество механизмов заболевания, от нейровоспалительных до аутоиммунных или, возможно, инфекционных или токсических агентов. Более новые исследования намекают на генетическую основу заболевания, но в большинстве гипотез задействован какой-либо воспалительный компонент, и многие результаты подтверждают эту теорию. Часто цитируемая гипотеза - протекающий эпителий. Здоровый мочевой пузырь покрыт тонким слизистым веществом, поверхность мочевого пузыря муцином, который состоит из многочисленных сульфированных гликозаминогликанов и гликопротеинов. У больных ИЦ, в отличие от контроля, а также у некоторых животных моделей ИЦ, наблюдались качественные изменения этого поверхностного слоя (Lilly et al, 1990., Moskowitz et al, 1994). Инициирующее событие (токсин) может привести к функциональным изменениям и повышению проницаемости. Это, в свою очередь, приводит к сенсибилизации нервов и, возможно, к повышению регуляции. Появляется все больше доказательств того, что прогрессирование ИЦ сопровождается значительной активацией сенсорных нервов в мочевом пузыре (Letourneau, 1996). Сообщалось, что фактор роста нервов (NGF), нейротропин, который сенсибилизирует ноцицепторные волокна, повышен в мочевом пузыре пациентов с интерстициальным циститом (Lowe, 1997), а применение NGF у крыс Wistar остро индуцировало гиперактивность мочевого пузыря (Chuang, 2001). Сенсорные нервы при нейрогенном воспалении секретируют медиаторы воспаления, такие как вещество P (SP), ноцицептивный нейромедиатор в центральной и периферической нервной системе. Повышенное количество выделяемого вещества Р было обнаружено в моче пациентов с ИЦ (Hohenfellner, et al., 1992, Pang et al., 1995, Pang et al., 1996), концентрация вещества P отражала степень боль (Chen et al., 1999). Вещество Р и родственные ему тахикинины (ТК) опосредуют различные физиологические процессы в мочеполовом, легочном и желудочно-кишечном тракте посредством стимуляции рецепторов NK1 и NK2. Доклинические данные, полученные при использовании селективных антагонистов рецепторов тахикинина, указывают на то, что эндогенные тахикинины участвуют в регуляции сокращения гладкой мускулатуры, вазодилатации, водного обмена и воспаления. Недавно было показано, что мРНК, кодирующая SP-рецептор NK1, увеличивается в биоптатах мочевого пузыря пациентов с интерстициальным циститом (Marchand et al., 1998). мРНК NK1R была обнаружена в мышцах детрузора, уротелии и сосудистых структурах, а эндотелиальные NK1R были заметно повышены. Связывание SP с NK1R на эндотелиальных клетках приводит к вазодилатации, экстравазации плазмы, высвобождению цитокинов, активации и инфильтрации иммунных клеток, что характерно для ИЦ. Эксперименты с мышами, нокаутными по NK1R, позволили впервые продемонстрировать обязательную потребность NK1R при цистите и участие этих рецепторов в цепи событий, связывающих дегрануляцию тучных клеток и воспаление (Saban et al., 2000).

Изменения в сарколемме и измененная экспрессия рецепторов тахикинина и брадикинина могут значительно влиять на последующие сигнальные события, ведущие к распространению симптомов хронической тазовой боли/ИЦ. Обнаружив связь между клиническими симптомами и молекулярной регуляцией атипичного воспалительного ответа, мы сможем предложить новые и специфические варианты лечения. В текущем предложении мы хотели бы продолжить наши исследования патологии мочевого пузыря, в частности симптоматического комплекса PBS/интерстициального цистита, и исследовать влияние изменений в уротелии и мышечных клетках детрузора человека на NK1R-опосредованную передачу сигналов.

Биопсии у пациентов из контрольной группы и пациентов с PBS будут получены либо под общей, либо при спинальной анестезии трансуретрально из купола мочевого пузыря и треугольника с помощью щипцов для биопсии. РНК будет извлечена, а уровни экспрессии выбранных генов проанализированы с использованием ПЦР Taqman в реальном времени и массивов экспрессии генов (Applied Biosystems). Визуализация кальция будет использоваться для мониторинга активации рецепторов и уровней белка, анализируемых с помощью SDS-PAGE и вестерн-блоттинга. Распределение рецепторов в тканях будет проанализировано с помощью иммуноцитохимии.