Investigação de doença residual mínima em tecido ovariano autopreservado em casos de patologia neoplásica (OVAGRAFT)

A criopreservação de tecido ovariano é oferecida a meninas e mulheres com menos de 35 anos que devem ser submetidas a tratamento gonadotóxico esterilizante, com o objetivo de preservar sua fertilidade. A parte principal do ovário é preservada, pois os folículos primordiais e primários são resistentes aos protocolos de congelamento/descongelamento. Na ausência de outras técnicas (maturação in vivo, injeção de folículos ovarianos isolados, etc.), o autoenxerto desse tecido criopreservado é atualmente a única técnica que permite restaurar a fertilidade. O autoenxerto só é possível se a indicação de criopreservação do ovário for uma patologia não neoplásica ou uma patologia maligna com baixo risco de metástase ovariana. Em outros casos de patologias neoplásicas, particularmente nos casos de leucemia aguda, o tecido ainda não pode ser reutilizado devido à falta de qualquer técnica codificada para avaliação de doença residual (DRM). A equipe há dois anos desenvolve e valida uma técnica para procurar doença residual em fragmentos de córtex ovariano em casos de leucemia aguda. Esta técnica é baseada em um protocolo original para dissociar o tecido ovariano para obter uma população de células ovarianas isoladas que podem ser analisadas por citometria de fluxo multicolor. A especificidade e sensibilidade da técnica foram demonstradas em modelo experimental. Este modelo consiste em procurar por citometria de fluxo de 8 cores células caracterizáveis ​​de leucemia adicionadas em diferentes diluições a uma população de células ovarianas isoladas retiradas do córtex ovariano modelo e até uma diluição de 10-5. Quando os marcadores moleculares estavam presentes no diagnóstico, eles foram encontrados por RQ-PCR (Reação em Cadeia da Polimerase Quantitativa em Tempo Real) com as mesmas diluições. O tecido modelo veio da perfuração ovariana laparoscópica em pacientes com síndrome dos ovários policísticos. O principal objetivo deste projeto é validar técnicas previamente codificadas com diferentes populações de células leucêmicas que possam ser caracterizadas. Pretendemos, então, adaptar e validar esta técnica para procurar MRD usando citometria de fluxo de 8 cores em fragmentos criopreservados de córtex ovariano de pacientes com leucemia que estão em risco de metástase. Os objetivos secundários serão implementar procedimentos para qualificação oncológica de enxertos em casos de patologia maligna e considerar as recomendações de uso desse tecido ovariano criopreservado pela técnica de autoenxerto para essas indicações.