Desenvolvimento de uma ferramenta de diagnóstico não invasiva de microbioma (ERA-niMIC)
Desenvolvimento de uma ferramenta de diagnóstico não invasiva para a análise da microbiota para melhorar os resultados reprodutivos em pacientes inférteis.
Embora o tecido do endométrio tenha sido tradicionalmente considerado livre de bactérias, estudos recentes documentaram a presença de um microbioma endometrial. Em um estudo piloto conduzido por nossa equipe de pesquisa, os microorganismos presentes no endométrio foram analisados em amostras de fluido endometrial (EF) usando sequenciamento de próxima geração (NGS). Consistente com estudos publicados anteriormente, em condições normais, o endométrio é composto principalmente por diferentes espécies do gênero Lactobacillus. Observou-se ainda que a presença de outras bactérias patogênicas, como Streptococcus e/ou Gardnerella, pode alterar o microbioma endometrial e perturbar o ambiente uterino, afetando as taxas de implantação e o sucesso da gravidez.
Este projeto visa validar o microbioma encontrado no endométrio de mulheres em idade reprodutiva e tentar corroborar a relação entre o microbioma endometrial e os resultados reprodutivos em pacientes submetidas a tratamento de reprodução assistida (ART). A utilização da ferramenta Endometrial Receptivity Analysis (ERA), juntamente com a análise da flora endometrial antes da transferência embrionária, permitirá avaliar o impacto da presença de patógenos endometriais na implantação em pacientes receptivas.
Portanto, o foco deste projeto é o desenvolvimento e validação clínica de uma ferramenta de diagnóstico não invasiva para análise da microbiota, agregando o estudo do microbioma à análise ERA.
Visão geral do estudo
Status
Condições
Intervenção / Tratamento
Descrição detalhada
A implantação embrionária é um processo crítico para a sobrevivência da espécie que é relativamente ineficiente, principalmente em humanos. Os elementos-chave são o embrião, o endométrio materno e a comunicação cruzada entre eles usando diferentes perspectivas científicas. A receptividade endometrial descreve o fenótipo que permite a adesão do embrião e a ocorrência da placentação. Devido à necessidade de um teste de diagnóstico molecular preciso e objetivo para o estado de receptividade do endométrio, a Análise de Receptividade Endometrial (ERA) foi desenvolvida. O teste ERA é um microarranjo de expressão personalizado que identifica a assinatura do perfil de expressão transcriptômica da janela personalizada de implantação (WOI). Sua utilidade clínica foi demonstrada em pacientes com falha de implantação, nas quais 25% delas têm uma WOI deslocada e ficam grávidas, uma vez que a transferência do embrião é realizada na WOI adequada prevista pelo ERA. No entanto, este procedimento requer uma biópsia endometrial (EB), que é a grande desvantagem deste teste de diagnóstico, porque a transferência do embrião tem que ser adiada para o próximo ciclo, e também os possíveis desconfortos causados às pacientes. Por esse motivo, um estudo piloto anterior foi realizado para confirmar se a receptividade endometrial pode ser prevista por métodos não invasivos em amostras de fluido endometrial (FE). O painel de genes do teste ERA foi interrogado em células epiteliais e estromais de biópsias endometriais e células isoladas do EF no nível de célula única, demonstrando que as células principais no EF se classificam juntamente com a população epitelial.
Por outro lado, para tentar entender melhor os mecanismos que conectam a receptividade endometrial e/ou implantação do embrião com um microbioma endometrial alterado, outro estudo piloto foi realizado para determinar a composição do microbioma endometrial após a análise do ribossoma 16S bacteriano RNA por NGS. Curiosamente, em pacientes com endométrio receptivo, diagnosticado por Endometrial Receptivity Array (ERA) que apresentavam microbioma endometrial com patógenos, ou não dominado por bactérias do gênero Lactobacillus (NLD) apresentaram implantação significativamente menor (23,1% vs 60,7% p = 0,02), taxas de gravidez (33,3% vs 70,6%, p = 0,03), gravidez em andamento por transferência de embrião (13,3% vs 58,8%, p = 0,03) e nascidos vivos (6,7% vs 58,8%, p = 0,002) do que aqueles com uma microbioma endometrial dominado por Lactobacillus (LD). Além disso, essa relação foi muito mais significativa quando as espécies patogênicas encontradas pertenciam aos gêneros Gardnerella e Streptococcus. Isso está de acordo com outros estudos publicados que analisam o impacto de patógenos endometriais em tratamentos de fertilização in vitro, destacando a importância do estudo de comunidades bacterianas para a saúde reprodutiva.
Diante desses resultados preliminares, o presente estudo tem como objetivo validar em um conjunto amostral maior, a relação entre o desequilíbrio do microbioma endometrial e o declínio no sucesso reprodutivo em pacientes submetidos à TARV. Para fazer isso, o desenho experimental será aprimorado nas seguintes áreas: (i) um tamanho de amostra maior será analisado para validar os resultados anteriores obtidos no estudo piloto anterior sobre o microbioma endometrial, (ii) amostras pareadas de fluido endometrial e biópsia será analisada para o perfil microbiano para estudar se existe variabilidade bacteriana associada ao tipo de amostra, (iii) a microbiota endometrial será avaliada simultaneamente com ERA como um diagnóstico complementar para esta ferramenta, e (iv) a análise do endométrio microbiota será realizada utilizando a mais avançada tecnologia em sequenciamento de metagenoma bacteriano para ampliar as informações dos microrganismos identificados em cada amostra.
Tipo de estudo
Inscrição (Real)
Contactos e Locais
Locais de estudo
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Buenos Aires, Argentina, C1425DGQ
- Pregna Medicina Reproductiva
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Santa Fe
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Rosario, Santa Fe, Argentina
- Gestanza Medicina Reproductiva
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British Columbia
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Burnaby, British Columbia, Canadá, V5G 4X7
- Pacific Center for Reproductive Medicine
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Madrid, Espanha, 28036
- ProcreaTec
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Malaga
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Fuengirola, Malaga, Espanha, 29640
- Clinica Fertia
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Connecticut
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Norwalk, Connecticut, Estados Unidos, 06861
- RMA Connecticut
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Florida
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Margate, Florida, Estados Unidos, 33063
- IVF Florida
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Missouri
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Chesterfield, Missouri, Estados Unidos, 63005
- Missouri Center for Reproductive Medicine (MCRM Fertility)
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Washington
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Arlington, Washington, Estados Unidos, 22203
- Dominion Fertility
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Osaka Prefecture
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Osaka, Osaka Prefecture, Japão, 557-0045
- Oak Clinic Sumiyoshi
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Selangor
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Petaling Jaya, Selangor, Malásia, 47810
- Alpha Fertility Center
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Mexico City, México, 11000
- New Hope Fertility Center
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Istanbul, Peru
- Bahceci Fulya IVF Center
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Gêneros Elegíveis para o Estudo
Método de amostragem
População do estudo
Descrição
Critério de inclusão:
- Pacientes em Fertilização In Vitro (FIV) / Injeção IntraCitoplasmática de Espermatozóides (ICSI) ou OVODON com indicação de ERA, com ou sem indicação de triagem genética pré-implantação (PGS), que recebem transferência embrionária com embriões congelados em estágio de blastocisto (dia 5/dia 6) em um ciclo de terapia de reposição hormonal (TRH).
- Idade materna: ≤40 anos (pacientes de fertilização in vitro/ICSI)
- Idade materna: ≤50 anos (pacientes com OVODONAÇÃO)
- Índice de Massa Corporal (IMC): 18,5 - 30 kg / m2 (ambos incluídos)
- Testes sorológicos negativos para vírus da imunodeficiência humana (HIV), vírus da hepatite B (HBV), vírus da hepatite C (HCV), reagina plasmática rápida (RPR) para sífilis
- Mulheres com fórmula menstrual regular (3-4 / 26-35 dias)
- Concentração de esperma: > 2 milhões de espermatozoides/ml
Critério de exclusão:
- Pacientes portadoras de Dispositivo Intra-Uterino (DIU) nos últimos 3 meses
- Pacientes que tomaram antibióticos prescritos nos últimos 3 meses antes da coleta da amostra. (Podem ser aceites os casos em que a paciente tenha recebido antibióticos profiláticos anteriores à punção ovariana no ciclo de estimulação, de acordo com a prática clínica padrão do centro. A administração deste antibiótico deve ser pelo menos 1 mês antes da colheita da amostra).
- Patologias anexiais ou uterinas como malformações uterinas que podem afetar a taxa de implantação (ex: pólipos, mioma intramural ≥ 4cm ou submucoso, septo, hidrossalpinge, etc). Pacientes acometidos (antes ou depois de sua inclusão) por qualquer uma das patologias descritas anteriormente, poderão participar deste estudo desde que sejam tratados cirurgicamente antes de qualquer procedimento do estudo.
- Existência de infecções bacterianas, fúngicas ou virais graves ou não controladas que, na opinião do investigador principal, possam interferir na participação do paciente no estudo ou na avaliação dos resultados do estudo.
- Qualquer doença ou condição médica que seja instável ou que possa colocar em risco a segurança do paciente e a adesão ao estudo.
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
- Modelos de observação: Coorte
- Perspectivas de Tempo: Prospectivo
Coortes e Intervenções
Grupo / Coorte |
Intervenção / Tratamento |
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Microbioma LD receptivo ao teste ERA
Pacientes receptivos pelo teste ERA com microbiota endometrial composta principalmente por diferentes espécies do gênero Lactobacillus, determinada por sequenciamento NGS.
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No mesmo dia em que for indicada a EB para ERA, no dia 5 de um ciclo de TRH com 5 dias de progesterona, de acordo com a prática clínica comum, uma amostra de EF será aspirada imediatamente antes da EB para ERA.
Esta amostra de EF será utilizada para o diagnóstico não invasivo do microbioma, também uma pequena porção do tecido endometrial obtido para o diagnóstico de receptividade endometrial por ERA será utilizada como controle para o estudo do microbioma endometrial.
As pacientes com endométrio receptivo continuarão sua ART de acordo com o protocolo clínico padrão.
As pacientes com endométrio não receptivo seguirão a recomendação derivada do teste ERA para a eleição do dia para uma segunda amostra de BE, na qual será repetida a coleta de amostra de EF.
Por fim, os resultados de receptividade e microbioma em EF serão correlacionados com os do tecido endometrial e com os resultados reprodutivos dessas pacientes após a transferência embrionária.
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Microbioma NLD receptivo ao teste ERA
Pacientes receptivos pelo teste ERA com microbiota endometrial composta por diferentes bactérias patogênicas como Streptococcus e Gardnerella, ou não dominada por bactérias do gênero Lactobacillus, determinada por sequenciamento NGS.
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No mesmo dia em que for indicada a EB para ERA, no dia 5 de um ciclo de TRH com 5 dias de progesterona, de acordo com a prática clínica comum, uma amostra de EF será aspirada imediatamente antes da EB para ERA.
Esta amostra de EF será utilizada para o diagnóstico não invasivo do microbioma, também uma pequena porção do tecido endometrial obtido para o diagnóstico de receptividade endometrial por ERA será utilizada como controle para o estudo do microbioma endometrial.
As pacientes com endométrio receptivo continuarão sua ART de acordo com o protocolo clínico padrão.
As pacientes com endométrio não receptivo seguirão a recomendação derivada do teste ERA para a eleição do dia para uma segunda amostra de BE, na qual será repetida a coleta de amostra de EF.
Por fim, os resultados de receptividade e microbioma em EF serão correlacionados com os do tecido endometrial e com os resultados reprodutivos dessas pacientes após a transferência embrionária.
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Desenvolvimento de um novo teste de diagnóstico não invasivo do Microbioma Endometrial (EM) em pacientes inférteis
Prazo: 24 meses
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Análise de DNA bacteriano por Next Generation Sequencing (NGS) usando fluido endometrial para o diagnóstico de EM.
Isso será medido pela porcentagem de cada DNA bacteriano em amostras de EF
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24 meses
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Taxa de nascidos vivos
Prazo: 40 semanas
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Número de bebês nascidos por transferência de embriões
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40 semanas
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Taxa de implantação
Prazo: 12 semanas
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Número de embriões implantados por número total de embriões transferidos
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12 semanas
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Abortos clínicos
Prazo: 20 semanas
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Número de abortos clínicos por número total de gestações
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20 semanas
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Gravidez ectópica
Prazo: 20 semanas
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Número de gestações ectópicas por número total de gestações
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20 semanas
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Taxa de gravidez
Prazo: 20 semanas
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Número de gravidezes por transferência de embriões
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20 semanas
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Gravidez bioquímica
Prazo: 20 semanas
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Número de gestações bioquímicas por número total de gestações
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20 semanas
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Taxa de gravidez em curso
Prazo: 40 semanas
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Número de gestações em andamento por transferência de embrião
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40 semanas
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Investigadores
- Cadeira de estudo: Carlos Simón, MD PhD, Igenomix
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Real)
Conclusão Primária (Real)
Conclusão do estudo (Real)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Real)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Palavras-chave
Termos MeSH relevantes adicionais
Outros números de identificação do estudo
- IGX1-MIC-CS-17-05
Plano para dados de participantes individuais (IPD)
Planeja compartilhar dados de participantes individuais (IPD)?
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
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