Sviluppo di uno strumento di diagnosi non invasivo del microbioma (ERA-niMIC)
Sviluppo di uno strumento di diagnosi non invasivo per l'analisi del microbiota per migliorare gli esiti riproduttivi nei pazienti infertili.
Sebbene il tessuto endometriale sia stato tradizionalmente considerato privo di batteri, recenti studi hanno documentato la presenza di un microbioma endometriale. In uno studio pilota condotto dal nostro gruppo di ricerca, i microrganismi presenti nell'endometrio sono stati analizzati in campioni di fluido endometriale (EF) utilizzando il sequenziamento di nuova generazione (NGS). Coerentemente con studi precedentemente pubblicati, in condizioni normali l'endometrio è composto principalmente da diversi specie del genere Lactobacillus. È stato inoltre notato che la presenza di altri batteri patogeni come Streptococcus e/o Gardnerella può alterare il microbioma endometriale e può interrompere l'ambiente uterino, influenzando i tassi di impianto e il successo della gravidanza.
Questo progetto mira a convalidare il microbioma trovato nell'endometrio delle donne in età riproduttiva e cercare di corroborare la relazione tra il microbioma endometriale e gli esiti riproduttivi nelle pazienti sottoposte a trattamento di riproduzione assistita (ART). L'uso dello strumento Endometrial Receptivity Analysis (ERA), insieme all'analisi della flora endometriale prima del trasferimento embrionale, consentirà di valutare l'impatto della presenza di patogeni endometriali sull'impianto in pazienti ricettive.
Pertanto, il focus di questo progetto è lo sviluppo e la validazione clinica di uno strumento diagnostico non invasivo per analizzare il microbiota, aggiungendo lo studio del microbioma all'analisi ERA.
Panoramica dello studio
Stato
Condizioni
Intervento / Trattamento
Descrizione dettagliata
L'impianto embrionale è un processo critico per la sopravvivenza della specie che è relativamente inefficiente, specialmente negli esseri umani. Gli elementi chiave sono l'embrione, l'endometrio materno e la comunicazione incrociata tra loro utilizzando diverse prospettive scientifiche. La ricettività endometriale descrive il fenotipo che consente l'adesione e la placentazione dell'embrione. A causa della necessità di un test diagnostico molecolare accurato e oggettivo per lo stato di ricettività dell'endometrio, è stata sviluppata l'analisi della ricettività endometriale (ERA). Il test ERA è un microarray di espressione personalizzato che identifica la firma del profilo di espressione trascrittomica della finestra personalizzata di impianto (WOI). La sua utilità clinica è stata dimostrata in pazienti con fallimento dell'impianto in cui il 25% di loro ha un WOI spostato rimanendo incinta una volta eseguito il trasferimento dell'embrione al WOI corretto previsto dall'ERA. Tuttavia, questa procedura richiede una biopsia endometriale (EB), che è il principale svantaggio di questo test diagnostico, perché il trasferimento dell'embrione deve essere ritardato al ciclo successivo, e anche i possibili disagi causati ai pazienti. Per questo motivo, è stato condotto un precedente studio pilota per confermare se la ricettività endometriale può essere prevista attraverso metodi non invasivi nei campioni di fluido endometriale (EF). Il pannello genico del test ERA è stato interrogato su cellule epiteliali e stromali da biopsie endometriali e cellule isolate dall'EF a livello di singola cellula, dimostrando che le cellule principali sull'EF si classificano insieme alla popolazione epiteliale.
D'altra parte, per cercare di comprendere meglio i meccanismi che collegano la ricettività endometriale e/o l'impianto dell'embrione con un microbioma endometriale alterato, è stato condotto un altro studio pilota per determinare la composizione del microbioma endometriale dopo l'analisi del microbioma 16S ribosomiale batterico RNA mediante NGS. È interessante notare che nelle pazienti con endometrio ricettivo, diagnosticato mediante Endometrial Receptivity Array (ERA) che avevano un microbioma endometriale con agenti patogeni o non dominato da batteri del genere Lactobacillus (NLD) hanno mostrato un impianto significativamente inferiore (23,1% vs 60,7% p = 0,02), gravidanza (33,3% vs 70,6%, p = 0,03), gravidanza in corso per trasferimento embrionale (13,3% vs 58,8%, p = 0,03) e nati vivi (6,7% vs 58,8%, p = 0,002) rispetto a quelli con un sano microbioma endometriale dominato da Lactobacillus (LD). Inoltre, questa relazione era molto più significativa quando le specie patogene trovate appartenevano al genere Gardnerella e Streptococcus. Ciò è in linea con altri studi pubblicati che analizzano l'impatto dei patogeni endometriali nei trattamenti di fecondazione in vitro, evidenziando l'importanza dello studio delle comunità batteriche per la salute riproduttiva.
Alla luce di questi risultati preliminari, il presente studio mira a convalidare in un campione più ampio la relazione tra lo squilibrio del microbioma endometriale e il declino del successo riproduttivo nei pazienti sottoposti a ART. Per fare ciò, il disegno sperimentale sarà migliorato nelle seguenti aree: (i) verrà analizzata una dimensione del campione più elevata per convalidare i precedenti risultati ottenuti nel precedente studio pilota sul microbioma endometriale, (ii) campioni accoppiati di fluido endometriale e la biopsia sarà analizzata per il profilo microbico per studiare se esiste variabilità batterica associata al tipo di campione, (iii) il microbiota endometriale sarà valutato simultaneamente con ERA come diagnosi supplementare per questo strumento, e (iv) l'analisi del microbiota endometriale microbiota verrà eseguito utilizzando la tecnologia più avanzata sul sequenziamento del metagenoma batterico per ampliare le informazioni dei microrganismi identificati in ciascun campione.
Tipo di studio
Iscrizione (Effettivo)
Contatti e Sedi
Luoghi di studio
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Buenos Aires, Argentina, C1425DGQ
- Pregna Medicina Reproductiva
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Santa Fe
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Rosario, Santa Fe, Argentina
- Gestanza Medicina Reproductiva
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British Columbia
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Burnaby, British Columbia, Canada, V5G 4X7
- Pacific Center for Reproductive Medicine
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Osaka Prefecture
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Osaka, Osaka Prefecture, Giappone, 557-0045
- Oak Clinic Sumiyoshi
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Selangor
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Petaling Jaya, Selangor, Malaysia, 47810
- Alpha Fertility Center
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Mexico City, Messico, 11000
- New Hope Fertility Center
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Madrid, Spagna, 28036
- ProcreaTec
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Malaga
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Fuengirola, Malaga, Spagna, 29640
- Clinica Fertia
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Connecticut
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Norwalk, Connecticut, Stati Uniti, 06861
- RMA Connecticut
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Florida
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Margate, Florida, Stati Uniti, 33063
- IVF Florida
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Missouri
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Chesterfield, Missouri, Stati Uniti, 63005
- Missouri Center for Reproductive Medicine (MCRM Fertility)
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Washington
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Arlington, Washington, Stati Uniti, 22203
- Dominion Fertility
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Istanbul, Tacchino
- Bahceci Fulya IVF Center
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Criteri di partecipazione
Criteri di ammissibilità
Età idonea allo studio
Accetta volontari sani
Sessi ammissibili allo studio
Metodo di campionamento
Popolazione di studio
Descrizione
Criterio di inclusione:
- Pazienti in fecondazione in vitro (IVF) / iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi (ICSI) o OVODON con indicazione di ERA, con o senza indicazione di screening genetico preimpianto (PGS), che ricevono il trasferimento embrionale con embrioni in stadio di blastocisti congelati (giorno 5/giorno 6) il un ciclo di terapia ormonale sostitutiva (HRT).
- Età materna: ≤40 anni (pazienti IVF/ICSI)
- Età materna: ≤50 anni (pazienti con OVODONAZIONE)
- Indice di massa corporea (BMI): 18,5 - 30 kg / m2 (entrambi inclusi)
- Test sierologici negativi per virus dell'immunodeficienza umana (HIV), virus dell'epatite B (HBV), virus dell'epatite C (HCV), reazione rapida al plasma (RPR) per la sifilide
- Donne con formula mestruale regolare (3-4 / 26-35 giorni)
- Concentrazione spermatica: > 2 milioni di spermatozoi/ml
Criteri di esclusione:
- Pazienti portatrici di dispositivo intrauterino (IUD) negli ultimi 3 mesi
- Pazienti che hanno assunto antibiotici prescritti negli ultimi 3 mesi prima della raccolta del campione. (Possono essere accettati quei casi in cui la paziente abbia ricevuto in precedenza profilassi antibiotica per puntura ovarica nel ciclo di stimolazione, secondo la pratica clinica standard del centro. La somministrazione di questo antibiotico dovrebbe avvenire almeno 1 mese prima della raccolta del campione).
- Patologie annessiali o uterine come malformazioni uterine che possono influenzare il tasso di impianto (es: polipi, miomi intramurali ≥ 4 cm o sottomucosi, setto, idrosalpinge, ecc.). I pazienti affetti (prima o dopo la loro inclusione) con una qualsiasi delle patologie precedentemente descritte, potranno partecipare a questo studio purché siano trattati chirurgicamente prima di qualsiasi procedura di studio.
- Esistenza di infezioni batteriche, fungine o virali gravi o incontrollate che, a giudizio del ricercatore principale, potrebbero interferire con la partecipazione del paziente allo studio o le valutazioni dei risultati dello studio.
- Qualsiasi malattia o condizione medica instabile o che possa mettere a rischio la sicurezza del paziente e la compliance allo studio.
Piano di studio
Come è strutturato lo studio?
Dettagli di progettazione
- Modelli osservazionali: Coorte
- Prospettive temporali: Prospettiva
Coorti e interventi
Gruppo / Coorte |
Intervento / Trattamento |
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Microbioma LD ricettivo al test ERA
Pazienti ricettive al test ERA con un microbiota endometriale composto principalmente da diverse specie del genere Lactobacillus, determinato mediante sequenziamento NGS.
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Nello stesso giorno in cui viene indicato l'EB per ERA, al 5° giorno di un ciclo di HRT con 5 giorni di progesterone, secondo la comune pratica clinica, verrà aspirato un campione di EF immediatamente prima dell'EB per ERA.
Questo campione EF verrà utilizzato per la diagnosi non invasiva del microbioma, inoltre una piccola porzione del tessuto endometriale ottenuto per la diagnosi di ricettività endometriale mediante ERA verrà utilizzata come controllo per lo studio del microbioma endometriale.
Quei pazienti con un endometrio ricettivo continueranno la loro ART secondo il protocollo clinico standard.
Quelle pazienti con endometrio non ricettivo seguiranno la raccomandazione derivata dal test ERA per l'elezione del giorno per un secondo campione EB, in cui verrà ripetuta la raccolta del campione EF.
Infine, i risultati di ricettività e microbioma in EF saranno correlati con quelli sul tessuto endometriale e con gli esiti riproduttivi di questi pazienti dopo il trasferimento dell'embrione.
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Microbioma NLD ricettivo al test ERA
Pazienti ricettive al test ERA con un microbiota endometriale composto da diversi batteri patogeni come Streptococcus e Gardnerella, o non dominato da batteri del genere Lactobacillus, determinato mediante sequenziamento NGS.
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Nello stesso giorno in cui viene indicato l'EB per ERA, al 5° giorno di un ciclo di HRT con 5 giorni di progesterone, secondo la comune pratica clinica, verrà aspirato un campione di EF immediatamente prima dell'EB per ERA.
Questo campione EF verrà utilizzato per la diagnosi non invasiva del microbioma, inoltre una piccola porzione del tessuto endometriale ottenuto per la diagnosi di ricettività endometriale mediante ERA verrà utilizzata come controllo per lo studio del microbioma endometriale.
Quei pazienti con un endometrio ricettivo continueranno la loro ART secondo il protocollo clinico standard.
Quelle pazienti con endometrio non ricettivo seguiranno la raccomandazione derivata dal test ERA per l'elezione del giorno per un secondo campione EB, in cui verrà ripetuta la raccolta del campione EF.
Infine, i risultati di ricettività e microbioma in EF saranno correlati con quelli sul tessuto endometriale e con gli esiti riproduttivi di questi pazienti dopo il trasferimento dell'embrione.
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Cosa sta misurando lo studio?
Misure di risultato primarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
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Sviluppo di un nuovo test diagnostico non invasivo del microbioma endometriale (EM) in pazienti infertili
Lasso di tempo: 24 mesi
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Analisi del DNA batterico mediante Next Generation Sequencing (NGS) utilizzando fluido endometriale per la diagnosi EM.
Questo sarà misurato dalla percentuale di ciascun DNA batterico nei campioni EF
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24 mesi
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Misure di risultato secondarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
|---|---|---|
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Tasso di natalità in diretta
Lasso di tempo: 40 settimane
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Numero di bambini nati per trasferimento di embrioni
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40 settimane
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Tasso di impianto
Lasso di tempo: 12 settimane
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Numero di embrioni impiantati per numero totale di embrioni trasferiti
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12 settimane
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Aborti clinici
Lasso di tempo: 20 settimane
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Numero di aborti clinici per numero totale di gravidanze
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20 settimane
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Gravidanze ectopiche
Lasso di tempo: 20 settimane
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Numero di gravidanze ectopiche per numero totale di gravidanze
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20 settimane
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Tasso di gravidanza
Lasso di tempo: 20 settimane
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Numero di gravidanze per trasferimento di embrioni
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20 settimane
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Gravidanze biochimiche
Lasso di tempo: 20 settimane
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Numero di gravidanze biochimiche per numero totale di gravidanze
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20 settimane
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Tasso di gravidanza in corso
Lasso di tempo: 40 settimane
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Numero di gravidanze in corso per trasferimento di embrioni
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40 settimane
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Collaboratori e investigatori
Sponsor
Investigatori
- Cattedra di studio: Carlos Simón, MD PhD, Igenomix
Studiare le date dei record
Studia le date principali
Inizio studio (Effettivo)
Completamento primario (Effettivo)
Completamento dello studio (Effettivo)
Date di iscrizione allo studio
Primo inviato
Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità
Primo Inserito (Effettivo)
Aggiornamenti dei record di studio
Ultimo aggiornamento pubblicato (Effettivo)
Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC
Ultimo verificato
Maggiori informazioni
Termini relativi a questo studio
Parole chiave
Termini MeSH pertinenti aggiuntivi
Altri numeri di identificazione dello studio
- IGX1-MIC-CS-17-05
Piano per i dati dei singoli partecipanti (IPD)
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