Retrovírus Endógenos na Leucemia Mielóide Aguda (ERVAL)

O transplante alogênico de células-tronco hematopoiéticas (TCTH) é a única terapia curativa para inúmeras doenças hematológicas malignas. Apesar dos recentes avanços na área, as taxas de recaída ainda são altas e a primeira causa de morte. A identificação de novos alvos terapêuticos relevantes é, portanto, urgentemente necessária.

Os retrovírus endógenos humanos (HERVs) representam 8% do genoma humano. Embora silenciados no estado estacionário (principalmente por mecanismos de metilação), as reativações dos HERVs têm sido descritas em diferentes condições, como doenças autoimunes ou câncer, levando a uma resposta imune inata e adaptativa. Várias questões são levantadas no campo da hematologia, onde poucos dados estão disponíveis, e o papel exato dos HERVs nessas doenças ainda não foi definido.

Nossa equipe está atualmente trabalhando no papel dos HERVs em diferentes tipos de câncer. Desenvolvemos uma abordagem de bioinformática para identificar HERVs superexpressos a partir de dados de RNAseq. Também desenvolvemos ensaios in vitro para avaliar a imunogenicidade de diferentes peptídeos de quadros de leitura aberta de HERVs e mostramos que vários epítopos compartilhados entre diferentes HERVs podem induzir uma resposta específica de células T CD8+. Mais recentemente, analisamos 151 dados de RNAseq de leucemia mielóide aguda (LMA) do TCGA e identificamos múltiplos HERVs superexpressos nesta doença. O teste de imunogenicidade está atualmente em andamento com o sangue do paciente no momento do diagnóstico.

O principal objetivo desta parte do nosso projeto é analisar o estabelecimento de uma resposta de células T CD8+ específicas para HERVs participando do efeito enxerto versus leucemia após TCTH para pacientes com LMA. Os objetivos secundários são analisar as relações entre essa resposta e diferentes fatores clínicos, como o início da DECH ou recaída.

Células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) de pacientes com LMA serão extraídas e congeladas em diferentes momentos: diagnóstico, remissão completa (pré-TCTH) e pós-TCTH (M3, M6 e M12). Este protocolo prospectivo está atualmente em andamento no Centre Hospitalier Lyon Sud, com cerca de 30 amostras já disponíveis.

Depois de selecionados HERVs relevantes, dextrâmeros específicos identificados por DNA barcode serão sintetizados. Esses dextrâmeros permitem a identificação de respostas específicas de células T direcionadas contra até 1000 epítopos, seremos capazes de rastrear células T específicas direcionadas contra HERVs superexpressos em AML para o HLA mais comum. A coloração de Dextramer será realizada em PBMCs após o descongelamento. As células positivas serão classificadas por citometria de fluxo e o DNA será expandido por PCR antes de realizar o sequenciamento, permitindo a identificação de sequências específicas por seu DNA barcode exclusivo.

A análise das respostas das células T CD8+ específicas dos HERVs após o TCTH nos permitirá definir melhor o papel dos HERVs no início do efeito enxerto versus leucemia. Uma resposta específica de células T sem GvHD definirá a relevância de tais peptídeos como antígenos específicos do tumor.