Endogene Retroviren bei akuter myeloischer Leukämie (ERVAL)

Die allogene hämatopoetische Stammzelltransplantation (HSZT) ist die einzige kurative Therapie für zahlreiche bösartige hämatologische Erkrankungen. Trotz der jüngsten Fortschritte auf diesem Gebiet sind die Rückfallraten immer noch hoch und die häufigste Todesursache. Die Identifizierung neuer relevanter therapeutischer Targets ist daher dringend erforderlich.

Humane endogene Retroviren (HERVs) machen 8 % des menschlichen Genoms aus. Während sie im Steady State (hauptsächlich durch Methylierungsmechanismen) zum Schweigen gebracht wurden, wurden Reaktivierungen von HERVs bei verschiedenen Erkrankungen wie Autoimmunerkrankungen oder Krebs beschrieben, die zu einer angeborenen und adaptiven Immunantwort führen. Auf dem Gebiet der Hämatologie, wo nur wenige Daten verfügbar sind, werden mehrere Fragen aufgeworfen, und die genaue Rolle von HERVs bei diesen Krankheiten muss noch definiert werden.

Unser Team arbeitet derzeit an der Rolle von HERVs bei verschiedenen Krebsarten. Wir haben einen bioinformatischen Ansatz entwickelt, um überexprimierte HERVs aus RNAseq-Daten zu identifizieren. Wir haben auch In-vitro-Assays entwickelt, um die Immunogenität verschiedener Peptide aus offenen Leserastern von HERVs zu bewerten, und zeigten, dass mehrere Epitope, die von verschiedenen HERVs geteilt werden, eine spezifische CD8+-T-Zell-Antwort induzieren können. Vor kurzem haben wir 151 RNAseq-Daten zu akuter myeloischer Leukämie (AML) von TCGA analysiert und mehrere überexprimierte HERVs bei dieser Krankheit identifiziert. Immunogenitätstests werden derzeit mit dem Blut des Patienten zum Zeitpunkt der Diagnose durchgeführt.

Das Hauptziel dieses Teils unseres Projekts ist die Analyse der Etablierung einer HERVs-spezifischen CD8+ T-Zell-Antwort, die am Graft-versus-Leukemia-Effekt nach HSCT für AML-Patienten beteiligt ist. Sekundäre Ziele sind die Analyse der Beziehungen zwischen dieser Reaktion und verschiedenen klinischen Faktoren wie dem Beginn einer GVHD oder einem Rückfall.

Periphere mononukleäre Blutzellen (PBMCs) von AML-Patienten werden zu unterschiedlichen Zeitpunkten entnommen und eingefroren: Diagnose, vollständige Remission (prä-HSCT) und nach HSCT (M3, M6 und M12). Dieses prospektive Protokoll wird derzeit am Centre Hospitalier Lyon Sud durchgeführt, wobei bereits rund 30 Proben verfügbar sind.

Nach der Auswahl relevanter HERVs werden spezifische Dextramere, die durch einen DNA-Barcode identifiziert werden, synthetisiert. Diese Dextramere ermöglichen die Identifizierung spezifischer T-Zell-Antworten, die gegen bis zu 1000 Epitope gerichtet sind, und wir werden in der Lage sein, spezifische T-Zellen, die gegen in AML überexprimierte HERVs gerichtet sind, auf die häufigsten HLA zu screenen. Dextramer-Färbung wird an PBMCs nach dem Auftauen durchgeführt. Positive Zellen werden durch Durchflusszytometrie sortiert und die DNA wird durch PCR expandiert, bevor die Sequenzierung durchgeführt wird, was die Identifizierung spezifischer Sequenzen durch ihren einzigartigen DNA-Barcode ermöglicht.

Die Analyse der HERV-spezifischen CD8+-T-Zell-Antworten nach HSCT wird es uns ermöglichen, die Rolle von HERV beim Einsetzen des Graft-versus-Leukemia-Effekts besser zu definieren. Eine spezifische T-Zellantwort ohne GvHD wird die Relevanz solcher Peptide als tumorspezifische Antigene definieren.