Retrovirus endógenos en la leucemia mieloide aguda (ERVAL)

El trasplante alogénico de células madre hematopoyéticas (TCMH) es la única terapia curativa para numerosas enfermedades hematológicas malignas. A pesar de los avances recientes en el campo, las tasas de recaída siguen siendo altas y constituyen la primera causa de muerte. Por lo tanto, se necesita con urgencia la identificación de nuevas dianas terapéuticas relevantes.

Los retrovirus endógenos humanos (HERV) representan el 8% del genoma humano. Mientras están silenciados en estado estacionario (principalmente por mecanismos de metilación), se han descrito reactivaciones de HERV en diferentes condiciones, como enfermedades autoinmunes o cáncer, lo que lleva a una respuesta inmune innata y adaptativa. Se plantean varias preguntas en el campo de la hematología donde hay pocos datos disponibles, y el papel exacto de los HERV en estas enfermedades aún está por definir.

Nuestro equipo está trabajando actualmente en el papel de los HERV en diferentes tipos de cáncer. Desarrollamos un enfoque bioinformático para identificar HERV sobreexpresados ​​a partir de datos de RNAseq. También desarrollamos ensayos in vitro para evaluar la inmunogenicidad de diferentes péptidos de marcos de lectura abiertos de HERV y demostramos que varios epítopos compartidos entre diferentes HERV pueden inducir una respuesta específica de células T CD8+. Más recientemente, analizamos 151 datos de RNAseq de leucemia mieloide aguda (AML) de TCGA e identificamos múltiples HERV sobreexpresados ​​en esta enfermedad. Las pruebas de inmunogenicidad están actualmente en curso con la sangre del paciente en el momento del diagnóstico.

El objetivo principal de esta parte de nuestro proyecto es analizar el establecimiento de una respuesta de células T CD8+ específicas de HERV que participe en el efecto injerto contra leucemia después de HSCT para pacientes con LMA. Los objetivos secundarios son analizar las relaciones entre esta respuesta y diferentes factores clínicos como la aparición de EICH o la recaída.

Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de pacientes con AML se extraerán y congelarán en diferentes momentos: diagnóstico, remisión completa (antes del HSCT) y después del HSCT (M3, M6 y M12). Este protocolo prospectivo está actualmente en curso en el Centre Hospitalier Lyon Sud, con alrededor de 30 muestras ya disponibles.

Después de haber seleccionado los HERV relevantes, se sintetizarán dextrámeros específicos identificados por código de barras de ADN. Estos dextrámeros, que permiten la identificación de respuestas de células T específicas dirigidas contra hasta 1000 epítopos, permitirán detectar células T específicas dirigidas contra HERV sobreexpresados ​​en AML para HLA más común. La tinción con dextrámero se realizará en las PBMC después de la descongelación. Las células positivas se clasificarán mediante citometría de flujo y el ADN se expandirá mediante PCR antes de realizar la secuenciación, lo que permitirá la identificación de secuencias específicas mediante su código de barras de ADN exclusivo.

El análisis de las respuestas de los linfocitos T CD8+ específicos de los HERV después del TCMH nos permitirá definir mejor el papel de los HERV en la aparición del efecto injerto contra leucemia. Una respuesta específica de células T sin GvHD definirá la relevancia de dichos péptidos como antígenos específicos de tumores.