Expressão do miR-155 na enxaqueca episódica e crônica

Fundo:

Dependendo da frequência mediana da cefaléia, a enxaqueca é definida como enxaqueca episódica (EM) (para quem tem menos de 15 dias de enxaqueca por mês) ou enxaqueca crônica (para quem tem pelo menos 15 dias de dor de cabeça por mês, 8 dos quais com características de enxaqueca, há pelo menos três meses). A cronificação da enxaqueca é frequentemente associada a um aumento progressivo da ingestão aguda de medicamentos, levando a uma condição conhecida como Cefaléia por Uso Excessivo de Medicamentos (CM-MOH).

Até agora, não há biomarcadores validados e confiáveis ​​da enxaqueca, mas a comunidade científica da dor de cabeça está investigando intensamente as assinaturas neurobiológicas da enxaqueca. Biomarcadores biológicos validados podem permitir vários avanços no manejo da enxaqueca por: (I) refinar o diagnóstico de acordo com as características biológicas; (II) prever a resposta a terapias avançadas; (III) prever quais pacientes estão em maior risco de cronificação da enxaqueca e marcar diferentes fases do ciclo da enxaqueca; (IV) a identificação de novos alvos moleculares para o desenvolvimento de fármacos. Cumprindo esses propósitos, uma classe de moléculas que recentemente ganhou enorme interesse são os microRNAs (miRNAs). Os miRNAs são pequenos RNAs não codificantes endógenos com cerca de 22 nucleotídeos de comprimento. Os miRNAs operam como reguladores pós-transcricionais da expressão gênica, promovendo a degradação do RNA mensageiro (mRNA) ou reprimindo a tradução do mRNA. O processo de regulação realizado pelos miRNAs é complexo e articulado, pois um miRNA individual pode ter como alvo centenas de mRNAs diferentes e, inversamente, cada mRNA pode ser regulado por múltiplos miRNAs. Estima-se que mais de 60% de todos os genes codificadores de proteínas são regulados por miRNAs que consequentemente determinam a modulação pleiotrópica de uma ampla variedade de processos celulares envolvendo diferenciação, desenvolvimento e sinalização. miRNAs estão envolvidos na geração e manutenção da dor e várias evidências sugerem que miRNAs específicos podem desempenhar um papel na enxaqueca.

O estudo micro-MIG corroborou a hipótese de que a expressão de diferentes miRNAs é alterada em EM e CM quando comparada a um grupo controle, embora nenhum miRNA específico tenha sido identificado como uma assinatura molecular forte e específica da enxaqueca.

O miRNA-155 pode ser considerado um regulador mestre da inflamação, pois sua expressão pode modular muitos estímulos inflamatórios, como: interleucina 1β (IL-1β), fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), alarminas (por exemplo, IL-1α), hipóxia, fator nuclear eritróide 2 relacionado ao fator 2 (NRF2), padrões moleculares associados a patógenos e a danos, bem como ao ligante do receptor toll-like (TLR) em vários tipos de células. Recentemente, várias linhas de evidência pré-clínica destacaram ainda mais o papel do miRNA-155 na inflamação e geração e manutenção da dor também como um alvo terapêutico viável. A inibição do miRNA-155 pode aliviar a hiperalgesia e a dor do câncer ósseo, bem como a dor neuropática em modelos de roedores in vivo. Portanto, pode-se inferir que o miRNA-155 também pode desempenhar um papel importante na inflamação neurogênica, um processo supostamente ocorrido no sistema trigeminovascular e relacionado aos mecanismos patogênicos subjacentes à dor da enxaqueca.

Os monócitos são componentes do sistema imunológico que podem desempenhar um papel na enxaqueca. Por exemplo, o tratamento abortivo da enxaqueca pode influenciar a função dos monócitos. O ácido acetilsalicílico inibe a quimiotaxia de monócitos, enquanto metoprolol, metoclopramida, dihidroergotamina e sumatriptano não têm impacto. Foi demonstrado que os microRNAs regulam a polarização dos macrófagos e os efeitos subsequentes na inflamação.

Mira:

A fim de esclarecer os mediadores envolvidos na fisiopatologia da enxaqueca e sua cronificação, pretendemos avaliar as diferentes expressões do miRNA-155 (em monócitos) em pacientes com EM, CM-MOH e controles saudáveis ​​(HCs). Em segundo lugar, pretendemos fornecer informações sobre a distribuição do fenótipo monócito nos três grupos.

Avaliações esperadas:

Para todos os pacientes está agendada uma única avaliação ao longo do tempo, durante a qual serão submetidos a:

• assinatura de consentimento informado
• visita de triagem
• coleta de dados clínicos e demográficos (com base na revisão de um diário de dor de cabeça)
• coleta de sangue venoso Todos os pacientes serão avaliados pela manhã, após jejum noturno e na fase interictal da enxaqueca.

A descrição detalhada dos métodos planejados para as análises bioquímicas pode ser encontrada aqui:

• 10.1186/s10194-020-01189-0;
• 10.1177/0333102420949201.

Cálculo do tamanho da amostra:

O tamanho da amostra foi calculado a partir de dados preliminares disponíveis, que mostraram uma diferença nos níveis de miR-155 em células mononucleares periféricas de 1,69 RQ (quantificação relativa), com desvios padrão de 1,15 e 2,69 RQ em controles saudáveis ​​e indivíduos com enxaqueca episódica, respectivamente. Essa diferença foi assumida como a mesma entre indivíduos episódicos e crônicos.

Portanto, assumindo um poder estatístico de 80 por cento, um nível de significância de 95 por cento e realizando a correção de Bonferroni, precisamos de um tamanho de amostra de 24 indivíduos para os três grupos experimentais (HCs, CM-MOH e EM). Considerando a possível variabilidade na dosagem, vamos inscrever pelo menos 30 indivíduos por grupo.

Análise estatística pré-planejada:

A diferença entre a expressão de miR155 entre CM-MOH, EM e HCs será determinada por testes paramétricos (ANOVA) ou não paramétricos (Kruskal-Wallis) dependendo da distribuição dos dados. Correlações paramétricas ou não paramétricas serão usadas para medir a relação entre variáveis ​​bioquímicas e variáveis ​​clínicas em pacientes com CM-MOH e EM. As análises multivariadas serão realizadas de acordo com os resultados da análise univariada. A significância estatística será estabelecida no nível de 5% (p<0,05).