Eficácia dos probióticos Bacillus Spore na redução da constipação, anorexia e ganho lento de peso em crianças

A desnutrição infantil é um problema premente de saúde pública, especialmente entre os menores de 5 anos, afetando o desenvolvimento físico, mental e motor, levando a problemas crónicos na idade adulta e nas gerações futuras. Um relatório da UNICEF, da OMS e do Banco Mundial (Março de 2020) enfatizou as alarmantes taxas globais de subnutrição, com 144,0 milhões de crianças com menos de 5 anos sofrendo de subnutrição, incluindo atraso no crescimento (47,0 milhões) e subnutrição grave (14,3 milhões). Os países de rendimento médio-baixo suportam o peso, com dois terços das crianças com atraso no crescimento e três quartos das crianças com baixo peso em todo o mundo. No Vietname (dados de 2020), 19,5% das crianças com menos de 5 anos sofrem de atraso no crescimento, 11,6% têm baixo peso e 4,7% são desnutridas. Paralelamente, a obstipação é um problema de saúde crescente na Ásia e em todo o mundo, afectando crianças mesmo nas economias desenvolvidas. A constipação funcional é prevalente em crianças (12-28%). No Vietname, 24,6% das crianças entre os 3 e os 5 anos enfrentam obstipação, atingindo um pico de 54,9% entre os 36 e os 48 meses. A constipação não tratada apresenta graves complicações físicas, psicológicas e socioeconômicas, como inflamação gastrointestinal, anorexia e má absorção de nutrientes. A anorexia, prevalente em crianças, afeta a absorção de nutrientes, o crescimento e a altura. Crianças anoréxicas apresentam riscos 2,5 a 3 vezes maiores de desnutrição por baixo peso e atraso no crescimento. Crianças que sofrem de desnutrição e distúrbios digestivos enfrentam deficiência na produção de enzimas, perda de nutrientes e disbiose intestinal, causando lento ganho de peso. Crianças desnutridas e com imunidade mais baixa tornam-se mais propensas a adoecer, agravando a anorexia e formando um ciclo problemático. Nos últimos anos, o papel dos probióticos na saúde e nas doenças humanas tem atraído a atenção dos pesquisadores. Isto pode ser parcialmente devido à excelente atividade dos probióticos na prevenção e alívio de doenças. Atualmente, a pesquisa sobre probióticos concentra-se principalmente no tratamento de doenças gastrointestinais com alguns probióticos tradicionais. No entanto, surge um problema quando a adição destes microrganismos dificilmente consegue sobreviver em ambientes extremamente agressivos. Portanto, os probióticos formadores de esporos têm atraído o interesse dos pesquisadores. A viabilidade e estabilidade destas bactérias são significativamente melhores quando comparadas com outros probióticos devido à sua capacidade de formação de esporos. Dentre as espécies de Bacillus, Bacillus clausii, Bacillus subtilis e Bacillus coagulans são bactérias que podem formar esporos estáveis ​​no ambiente ácido do suco gástrico e, portanto, passar pelo estômago com segurança e também produzir enzimas digestivas como amilase e protease no intestino. B. coagulans é a única espécie de Bacillus capaz de produzir ácido lático, que reduz o pH, levando o ambiente a um estado levemente ácido. Esta é uma excelente condição ambiental para o crescimento de bactérias intestinais benéficas e para prevenir o crescimento de bactérias nocivas. Ao mesmo tempo, aumenta a absorção e melhora a anorexia e a constipação em crianças. Estudos anteriores também demonstraram que os probióticos podem reduzir significativamente o tempo de retenção de fezes nos intestinos e melhorar a consistência das fezes. Com base nos resultados da pesquisa acima, os probióticos de esporos podem ser considerados agentes naturais e seguros para aliviar a constipação, a anorexia e retardar o ganho de peso em crianças. Para fundamentar este argumento, os investigadores planejam conduzir um ensaio clínico intitulado "Avaliando a eficácia dos probióticos de esporos LiveSpo® Preg-Mom e LiveSpo® KIDS no apoio à redução da constipação, anorexia e ganho lento de peso em crianças de 24 a 60 anos meses".

O objetivo geral deste estudo é avaliar a eficácia de dois tipos de probióticos, o primeiro contendo 3 bilhões de esporos de três espécies bacterianas, Bacillus subtilis, B. clausii e esporos de B. coagulans (LiveSpo® Preg-Mom) ​​por ampola e o segundo com 3 bilhões de esporos de duas espécies bacterianas por ampola (LiveSpo® KIDS), incluindo Bacillus subtilis e B. clausii, no apoio ao tratamento de crianças com constipação, anorexia e ganho de peso lento.

O primeiro objetivo é avaliar a eficácia desses produtos no alívio dos sintomas típicos de constipação, anorexia e lento ganho de peso. O objetivo secundário é medir as mudanças nas citocinas típicas no sangue, nos índices de IgA nas fezes e na composição da microbiota nas fezes antes e depois do uso suplementar de LiveSpo® Preg-Mom e LiveSpo® KIDS.

Para tanto, o estudo foi desenhado como um ensaio clínico randomizado, duplo-cego e controlado com 201 participantes com diagnóstico de constipação, anorexia e lento ganho de peso. Os participantes são randomizados em 3 grupos usando randomização em blocos permutados: um grupo de controle usando água RO (CC), grupo experimental 1 usando LiveSpo® Preg-Mom (AA) e grupo experimental 2 usando LiveSpo® KIDS (BB). Cada paciente recebe 2 ampolas do produto probiótico atribuído diariamente, divididas em 2 doses diárias. O estudo inclui avaliação clínica de indicadores nos dias 0, 7 e 28, como peso, tipos de fezes, frequência de evacuações diárias e tempo médio de alimentação por refeição.

Conteúdos e Métodos de detecção subclínica. Os participantes do estudo são crianças de 24 a 60 meses com diagnóstico de constipação, anorexia e ganho de peso lento.

• Os testes hematológicos e bioquímicos são realizados nos dias 0 e 28 no hospital MEDLATEC (nome próprio), no Vietnã.
• Um ensaio de PCR em tempo real é conduzido em amostras de fezes nos dias 0, 7 e 28 no Spobiotic Research Center (nome próprio) para detectar esporos probióticos, incluindo B. subtilis, B. clausii e B. coagulans, para cruzar. verificar o uso adequado de probióticos ou placebo nos grupos experimental e controle, respectivamente.
• Os testes ELISA são realizados nos dias 0, 7 e 28 no Spobiotic Research Center (nome próprio) para determinar os níveis de citocinas pró-inflamatórias/anti-inflamatórias em amostras de sangue e os níveis de IgA em amostras de fezes, respectivamente, para avaliar alterações no sistema imunológico. indicadores relacionados durante o tratamento de suporte.
• Os testes que indicam proporções de bactérias Gr (+) e Gr (-) em amostras de fezes são realizados nos dias 0, 7 e 28 no hospital MEDLATEC (nome próprio), a fim de: avaliar a mudança no equilíbrio entre os tipos de bactérias Gr (+) e Gr (-) bactérias no intestino.
• A análise de sequenciamento do metagenoma 16S V3-V4 é realizada na Macrogen (Seul, Coréia) usando tecnologia de sequenciamento de próxima geração (NGS) na plataforma Illumina MiSeq (Illumina, San Diego, CA, EUA), utilizando uma corrida de 2 × 250 pb configuração. Amostras de DNA extraídas de amostras de fezes de cerca de 10 pacientes representativos de cada grupo no dia 0 e no dia 28 são utilizadas para a análise, para identificar alterações no microbioma.
• A coleta de dados e a análise estatística envolvem a coleta de registros médicos individuais e a sistematização das informações do paciente em um conjunto de dados.

A análise tabular é realizada em variáveis ​​dicotômicas por meio do teste χ2 ou teste exato de Fisher quando o valor esperado de qualquer célula for inferior a cinco. As variáveis ​​contínuas são comparadas por meio do teste de Wilcoxon, teste t ou teste de Mann-Whitney quando os dados não apresentam distribuição normal. Para determinar se há diferença estatisticamente significativa entre os três grupos, é realizado um teste ANOVA. A análise de correlação de Spearman avalia as correlações entre as variáveis. As análises estatísticas e gráficas são realizadas no software GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, EUA). O nível de significância de todas as análises é fixado em p < 0,05. Valores P. A eficácia de LiveSpo® Preg-Mom e LiveSpo® KIDS é avaliada e comparada ao controle com base nos seguintes critérios clínicos e subclínicos obtidos dos grupos Experimento e Controle: O resultado primário é: (i) Alívio sintomático da constipação, anorexia e ganho de peso lento; Os resultados secundários são: (ii) Níveis regulados de citocinas pró-inflamatórias, como IL-6, IL-10, IL-17, IL-23 e TNF-alfa em amostras de sangue. (iii) Níveis regulados de IgA em amostras fecais. (iv) Maior diversidade e contagem de espécies bacterianas benéficas em comparação com bactérias nocivas na microbiota intestinal.