Metabolome pós -prandial e flexibilidade metabólica

Os assuntos inscritos são seguidos toda semana por um mês. Em cada visita, um questionário avalia os padrões de atividade do tempo diário relevantes para o gasto energético, o estado geral de saúde, incluindo sintomas infecciosos e confirmação de características sociais e demográficas básicas. A ingestão dietética é avaliada por um questionário de frequência alimentar e uma recall dietética de 24 horas em várias etapas para análise quantitativa. Se houver sintomas de infecção, os participantes são tratados com antibióticos amplos ad-hoc. Antropometria é obtida. Os sujeitos serão randomizados para receber os desafios metabólicos em uma ordem diferente. Os procedimentos serão realizados antes (jejum; 8 a 10 horas) e após o consumo (pós-prandial) dos desafios metabólicos. As amostras de sangue capilar (40µ) são obtidas de manhã após um jejum de 8 horas e após o consumo de refeições de teste. Para obter a amostra de sangue capilar, esterilize o dedo anelar com álcool e deixe secar. Em seguida, perfure a área com uma lancet estéril de 2 mm de comprimento. Depois que a queda do sangue é formada, ele é colocado diretamente na cassete cardiocheck Plus® para determinar o triglicerídeo de glicose, LDL-colesterol, HDL-colesterol e colesterol total. Uma segunda gota de sangue capilar deve ser colocada em um papel de filtro (S&S 903) até que um círculo de papel de filtro seja preenchido com sangue para saturar o papel durante toda a espessura. A concentração de insulina deve ser determinada seguindo o protocolo para sangue seco, que é padronizado em laboratório. A calorimetria de jejum indireta também é realizada. Após a calorimetria indireta, a resposta metabólica e hormonal à refeição do teste é realizada.

Cada desafio deve ser consumido em 15 minutos. Após 5 minutos de descanso, a calorimetria indireta será pós -prandial, com duração de 30 minutos. O sangue capilar deve ser obtido nos seguintes horários: 15-30-45-60-90 e 120 minutos após a ingestão de alimentos.

Composição de nutrientes da refeição padronizada e exemplo de refeição.

• Alto desafio de carboidratos: energia, 479,6 kcal; Carboidratos, 83,6%; Lipídios, 12,4% e proteína, 4,0% (70 g de bolo quente, 100 g de manga, 270 ml de néctar de pêssego e 40 g de geléia de morango)
• Alto desafio lipídico: energia, 1043,4 kcal; Carboidrato, 4,9%; Lipídios, 86,8%, e proteína, 8,3% (60 g de queijo manchego, 25 g de ovo, branco, seco, 24 g de bacon, 5 ml de óleo, 65 g de cream cheese, 70 g de creme e 16 g de pimenta poblano)
• Alto desafio de proteína: energia, 441,3 kcal; Carboidrato, 1,6%; Lipídios, 5,1%, e proteína, 93,3% (2 colher de zero carboidrato, 180 g de peito de frango, 20 g de alface e 24 g de peito de peru de presunto)

Determinação de metabólitos no sangue seco para determinar a concentração de metabólitos (aminoácidos e acil-carnitinas), um círculo de 3 mm de diâmetro deve ser perfurado do papel de filtro e colocado em uma placa de 96 poços. Adicione 100 µl dos padrões de acil-carnitina e aminoácidos do kit neobase perkinelmer. Posteriormente, siga as instruções do fabricante para determinar metabólitos por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa (LC-MS).

Determinação do quociente respiratório (RQ) para determinar o quociente respiratório (RQ = VMAXCO2/ VMAXO2) e exames de oxidação lipídica e de carboidratos, o técnico Cardio Co2 VMAX Encore 29 Sistemas de calorímetro (Korr, Inc, UT, EUA) serão usados ​​de acordo com os instrutores 29. Os exames são invariavelmente realizados de manhã (8: 00-9: 00) em um ambiente termoneutro com pressão, umidade e temperatura controlados, com o paciente em decomposição, mas acordado. Os investigadores examinam um máximo de dois indivíduos por dia. O consumo de oxigênio e a produção de dióxido de carbono foram obtidos usando um dossel e foram monitorados continuamente por 30 minutos. Os 10 minutos iniciais da medição são descartados para o cálculo para garantir maior homogeneidade de dados. O consumo de O2 e a produção de CO2 serão registrados continuamente por 30 min. Os valores de VO2 e VCO2 serão usados ​​na equação proposta por Weir (despesa de energia = [3.941 (VO2) + 1.11 (VCO2)] x 1440 min/dia), considerado o método padrão [34]. Além disso, um dia antes do teste, os sujeitos são instruídos a jejuar por 8 horas e não se envolver em atividade física ou consumir cafeína no dia anterior ao exame. Todos os participantes serão solicitados a comer o mesmo jantar na noite anterior a cada teste. O jantar fornece 15% da ingestão diária de energia; 20 g de proteína, 7 g de lipídios e 34 g de carboidratos)