Clostridium Butyricum na Doença de Crohn Estenosante (AUTOCD)

A doença de Crohn é uma doença inflamatória intestinal crónica e recidivante com etiologia desconhecida, envolvendo desregulação imunitária e alterações da microbiota. A doença estenosante (fenótipo B2 de Montreal) representa uma grande necessidade terapêutica não satisfeita, uma vez que atualmente não existem terapias farmacológicas disponíveis para a fibrose intestinal, que é frequentemente tratada cirurgicamente.

A autofagia, um regulador fundamental da homeostase celular, tem sido associada à patogénese da doença de Crohn, com estudos genéticos a identificarem polimorfismos em genes relacionados com a autofagia. A autofagia comprometida pode exacerbar a inflamação, o stresse oxidativo e os danos nos tecidos. Dados preliminares do nosso grupo mostram uma redução da autofagia em doentes com doença de Crohn estenosante em comparação com aqueles com fenótipo inflamatório ou controlos saudáveis.

O Clostridium butyricum, um probiótico de nova geração com forte atividade produtora de butirato, exerce efeitos anti-inflamatórios e de proteção da mucosa, em parte através da estimulação da autofagia. A sua utilização pode representar uma nova abordagem terapêutica para prevenir ou mitigar complicações fibroestenosantes na doença de Crohn.

Este é um estudo piloto clínico de intervenção sem fins lucrativos, que recrutará 40 doentes com doença de Crohn estenosante (B2, classificação de Montreal; localização L2 ou L3). Os doentes submetidos a colonoscopia clinicamente indicada serão randomizados para um de quatro grupos para receber, durante dois meses antes do procedimento:

1. Suplementação com C. butyricum
2. Suplementação com trealose (um indutor de autofagia conhecido)
3. C. butyricum + trealose combinados
4. Placebo Durante a colonoscopia, serão obtidas biópsias de rotina, sendo recolhidas duas amostras adicionais para fins de investigação, juntamente com amostras de sangue periférico. As análises laboratoriais centrar-se-ão nos mediadores moleculares da inflamação, fibrose, stresse oxidativo e vias da autofagia.

O objetivo principal é testar a hipótese de que o C. butyricum é seguro e capaz de estimular processos autofágicos locais na mucosa intestinal de doentes com doença de Crohn estenosante.

Os objetivos secundários incluem avaliar as vias relacionadas com a autofagia (inflamação, fibrose, produção de ROS, atividade da NADPH oxidase) e comparar os resultados entre os quatro grupos de tratamento. Serão utilizados procedimentos laboratoriais para avaliar e quantificar, em amostras biópsicas e sanguíneas, a autofagia, inflamação, fibrose e stresse oxidativo. Em particular, a autofagia será avaliada pela medição dos marcadores autofágicos mucosos LC3b-II e p62. A inflamação será avaliada medindo a expressão de citocinas pró-inflamatórias (TNFα, IFNγ, IL-17 e COX2), quantificando o mRNA por PCR em tempo real (RT) com primers específicos. A fibrose será avaliada pela quantificação do mRNA dos genes relacionados Col1a1, α-sma, Snail1, Snail2, TGFβ. Finalmente, os níveis de stresse oxidativo serão avaliados medindo marcadores séricos como sNOX2-dp, H2O2 e a atividade de degradação do peróxido de hidrogénio sérico (HBA).