Timoquinona em torno do Implante Imediato (Thymoquinone)

A colocação imediata de implantes dentários ganhou popularidade para a substituição de dentes extraídos devido às suas vantagens, incluindo um tempo de tratamento mais curto, uma melhor preservação do volume ósseo alveolar e resultados estéticos aprimorados. No entanto, o sucesso dos implantes imediatos depende em grande parte da obtenção de uma osteointegração ótima, definida como a ligação estrutural e funcional direta entre o osso vivo e a superfície de um implante de carga. Fatores como as propriedades da superfície do implante, as técnicas cirúrgicas e variáveis específicas do paciente, incluindo a qualidade óssea, influenciam este processo.

Extensas investigações visaram melhorar o contacto osso-implante (BIC), um fator chave para uma osteointegração bem-sucedida. As estratégias incluem a modificação da morfologia da superfície do implante e a aplicação de agentes bioativos, ambas destinadas a melhorar o BIC e apoiar a integração do implante a longo prazo.

Muitos estudos pré-clínicos e clínicos documentaram a regeneração de espaços horizontais inferiores a 2 mm na presença de um coágulo sanguíneo estável, mas quando a distância do espaço peri-implantar era superior a 2 mm, o enxerto ósseo deve ser utilizado para selar este defeito ósseo.

A fitoterapia tem ganhado a atenção dos investigadores para o tratamento de doenças orais e periodontais devido aos seus efeitos benéficos, mais seguros, integrados, custo reduzido e efeitos secundários mínimos. A Nigella sativa (NS) é conhecida como "semente preta", uma flor da planta que cresce no Médio Oriente, em alguns países asiáticos e mediterrânicos.

A Timoquinona (TQ) é um dos principais componentes bioativos da NS, tendo um valioso efeito terapêutico devido às suas propriedades antioxidantes, antimicrobianas, analgésicas, anti-inflamatórias, anti-hipertensivas, anti-histamínicas, hipoglicémicas, hepatoprotetoras, anticarcinogénicas e imunoativadoras. Considerando as características anti-inflamatórias, antimicrobianas e antioxidantes da TQ, esta pode desempenhar um papel significativo na prevenção do início, progressão e tratamento de doenças periodontais.

A NS e o seu ingrediente ativo TQ têm sido utilizados para o tratamento de hipertensão, cancro, artrite reumatoide, diabetes, asma brônquica, hipertensão, obesidade, doença de Behçet, lesões hepáticas e outras doenças metabólicas e autoimunes. Verificou-se que a TQ é responsável pelo efeito terapêutico da NS.

A NS e a TQ demonstraram abundantes propriedades terapêuticas em diferentes doenças e condições orais, como cárie dentária, medicação intracanal, ulcerações orais, mucosite, cicatrização de feridas, cicatrização óssea pós-extração, cancro oral, doenças gengivais e periodontais. Os efeitos da TQ em contextos associados a doenças periodontais e os seus modos de ação com potenciais benefícios para a terapia periodontal têm sido investigados em vários estudos. Estes incluem estudos in vitro, estudos in vivo (animal) e estudos clínicos (ECR).

O modo de ação da TQ nas doenças periodontais é a atividade anti-inflamatória e antioxidante através da supressão de citocinas inflamatórias (IL-1b, IL-6, TNF-α, PGE), ativação da IL-10 e supressão do NO. As propriedades antibacterianas através da supressão da resistência bacteriana e desintegração das membranas bacterianas. Efeito modulador das células estaminais através da ativação da migração de células estaminais e imunomodulação das células estaminais e potenciais mecanismos regenerativos destes ricos compostos naturais.

Diferentes estudos avaliaram o efeito de diferentes materiais de gel em torno da colocação imediata de implantes, como géis de melatonina e ácido hialurónico, Vit.D tópica em torno do implante imediato e gel de sinvastatina.

Até onde sabemos, não existe nenhum estudo humano que avalie o efeito da TQ na gestão da distância do espaço em torno da colocação imediata de implantes. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito do gel de TQ tópico em torno da colocação de implantes imediatos, tanto clínica como radiograficamente.

Objetivo do estudo Resultado primário: Avaliar o efeito do hidrogel de TQ em torno da colocação imediata de implantes, clínica e radiograficamente.

Resultado secundário: Comparar o efeito do hidrogel de TQ com enxerto ósseo em comparação com apenas enxerto ósseo em torno do implante, clínica e radiograficamente.

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Pacientes e Métodos

Desenho do estudo:

Este ensaio clínico controlado randomizado será realizado em 44 pacientes. Todos os pacientes serão selecionados da clínica de doentes externos do Departamento de Medicina Oral, Diagnóstico Oral e Periodontologia. Faculdade de Medicina Dentária, Universidade de Minia.

Cálculo do tamanho da amostra:

O tamanho da amostra foi calculado utilizando o G*Power (versão 3.1.9.7) para uma ANCOVA (efeitos fixos, incluindo efeitos principais e interações) que compara dois grupos enquanto ajusta uma covariável. Assumindo um tamanho de efeito de f = 0,56 (parcial), com um desenho de dois grupos, um nível alfa (α) de 0,05 e um poder (1-β) de 0,95, o tamanho total da amostra necessário é de 44 participantes, o que se decompõe em 22 participantes por grupo. Com este tamanho de amostra, os graus de liberdade do denominador seriam 41 (calculado como N total, número de grupos, número de covariáveis: 44 - 2 - 1 = 41). Esta configuração permite poder suficiente para detetar um efeito enquanto se contabiliza a covariável.

O plano de tratamento completo será explicado a todos os pacientes, incluindo passos detalhados, riscos e resultados esperados, e o seu consentimento assinado será obtido antes da entrada no estudo. O estudo será cumprido com as regras estabelecidas pelas Diretrizes de Boas Práticas Clínicas da Conferência Internacional sobre Harmonização, a Declaração de Helsínquia e o comité de ética de investigação da Faculdade de Medicina Dentária, Universidade de Minia.

Grupos do estudo e randomização O estudo incluirá 44 implantes imediatos que substituem dentes posteriores não restauráveis. Os pacientes foram aleatoriamente atribuídos em números iguais a dois grupos utilizando http://www.randomizer.org Grupo I (Controlo): 22 implantes serão inseridos imediatamente após a extração dos dentes com xenoenxerto.

Grupo II (Estudo): 22 implantes serão inseridos imediatamente após a extração dos dentes, combinando xenoenxerto e gel de TQ.

Fase pré-operatória Exame clínico Dados pessoais, incluindo nome, idade, género, ocupação e informações de contacto, serão recolhidos para cada paciente.

Será obtido um histórico médico e dentário detalhado para excluir aqueles com condições ou hábitos que possam impactar negativamente a estabilidade do implante.

A higiene oral será avaliada e os pacientes serão encaminhados para o Departamento de Medicina Oral e Periodontologia para destartarização e polimento. A oclusão será avaliada para garantir um alinhamento e contacto adequados.

O procedimento cirúrgico e potenciais complicações (por exemplo, hemorragia, dor, inchaço, falha do implante) serão explicados a cada paciente. Fotografias e radiografias de acompanhamento serão utilizadas para documentação e monitorização da cicatrização. Estes dados serão recolhidos para garantir que cada paciente cumpre os critérios de inclusão.

Preparação do gel de TQ:

Niosomas carregados com TQ serão preparados utilizando o método de injeção de etanol (Mostafa et al.). A formulação consistiu em Span 60, colesterol, PEG 4000 e TQ numa proporção em peso de 90:35:5:10, respetivamente. Para um lote representativo, serão utilizados 90 mg de Span 60, 35 mg de colesterol, 5 mg de PEG 4000 e 20 mg de TQ. O Span 60 e o colesterol serão dissolvidos em 5 mL de etanol absoluto (fase orgânica) e aquecidos suavemente num banho-maria a 60-70 °C com agitação até se obter uma solução límpida. Entretanto, o PEG 4000 será dissolvido em 10 mL de solução tampão fosfato (PBS, pH 7,4) pré-aquecida para preparar a fase aquosa, que será mantida à mesma temperatura da fase orgânica.

A solução lipídica etanólica será injetada lentamente na fase aquosa a uma taxa de aproximadamente 0,5-1 mL por minuto sob agitação magnética contínua (800 rpm) mantendo a temperatura a 60-70 °C. A agitação continuará por mais 20 minutos após a injeção ser concluída para garantir a formação adequada de vesículas. O etanol residual será então removido por evaporação rotativa sob pressão reduzida até restar solvente insignificante. A dispersão niosomal resultante será então sonicada num banho de gelo utilizando um sonicador de banho-maria durante 2 min para reduzir o tamanho das partículas e obter uma distribuição uniforme. A Timoquinona será encapsulada nos niosomas utilizando a abordagem de pós-inserção. Em resumo, TQ (20 mg) será dissolvida em 2 ml de etanol e adicionada à suspensão niosomal pré-formada sob agitação e incubada durante 2 h a 37 °C.

A timoquinona não encapsulada será separada por ultracentrifugação a 15000 rpm durante 60 minutos a 4 °C, e o pellet niosomal recolhido será ressuspenso em PBS até ao volume original. Os niosomas de timoquinona purificados serão armazenados a 4 °C, protegidos da luz, até caracterização adicional.

A eficiência de encapsulação (EE%) foi determinada quantificando a quantidade de timoquinona livre no sobrenadante após purificação utilizando um método UV-VIS validado. O comprimento de onda de deteção será definido em 254 nm. A EE% será calculada utilizando a equação EE% = [(Wt - Wf) / Wt] × 100, onde Wt é a timoquinona total adicionada e Wf é a quantidade de fármaco livre detetada no sobrenadante.

Os niosomas preparados serão caracterizados quanto ao seu tamanho médio de partícula, índice de polidispersão (PDI) e potencial zeta utilizando técnicas de espalhamento de luz dinâmico e eletroforético (DLS/ELS) a 25 °C. As amostras foram diluídas 20-100 vezes em PBS antes da medição. Cada medição será realizada em triplicado, e os resultados serão expressos como média ± DP. A morfologia da superfície dos niosomas será examinada por microscopia eletrónica de varrimento (SEM). Uma gota de dispersão niosomal diluída será colocada num suporte de alumínio, seca ao ar sob vácuo, revestida por pulverização com uma fina camada de ouro-paládio (≈5 nm) e imagiografada a uma voltagem de aceleração de 5-15 kV.

O estudo de fotostabilidade será realizado para avaliar a fotostabilidade da TQ dentro do sistema niosomal. Alíquotas de fármaco livre e dispersão niosomal (5 mL cada) serão armazenadas em frascos de vidro transparente expostos à luz UV a 25 ± 2 °C, e as análises serão realizadas em intervalos de tempo pré-determinados para o teor de fármaco. A percentagem de TQ restante será traçada em função do tempo para avaliar a fotostabilidade dos niosomas.

Fase cirúrgica:

1. Os procedimentos cirúrgicos serão realizados seguindo protocolos rigorosos de controlo de infeção. Os pacientes serão instruídos a fazer bochechos com clorexidina a 0,1% (elixir bucal antiséptico Hexitol, Arabian Drug Company (ADCO), Cairo, Egito) e os tecidos peri-orais serão desinfetados com povidona-iodo (Betadine, Nile Co. for Pharma, Cairo, Egito).
2. A anestesia local será injetada através da técnica de infiltração ou bloqueio nervoso utilizando cloridrato de articaína a 4% com epinefrina 1:100.000 (Artinibsa, Inibsa Dental SLU, Espanha).
3. Serão realizadas extrações dentárias atraumáticas, preservando o osso alveolar. As dimensões do alvéolo de extração e do osso residual serão avaliadas utilizando uma sonda periodontal, além de medir a largura e o comprimento da raiz do dente extraído, para garantir a seleção apropriada do implante. Serão realizadas medições para confirmar a compatibilidade com o tamanho planeado do implante e garantir uma colocação adequada.
4. A perfuração da osteotomia seguiu um protocolo padronizado, utilizando brocas sequenciais e torque e velocidade adequados sob irrigação copiosa.
5. No grupo de controlo, o xenoenxerto será aplicado tanto na superfície do implante como no local da osteotomia após a colocação do implante.

Enquanto no grupo de estudo, xenoenxerto misturado com gel de TQ será inserido em torno do implante.

Fase pós-cirúrgica:- Instruções pós-cirúrgicas Após a cirurgia, os pacientes receberão instruções detalhadas de cuidados pós-operatórios e medicamentos prescritos, incluindo comprimidos de Cataflam 50 mg (Diclofenac potássico), um fármaco anti-inflamatório não esteroide tomado duas vezes ao dia durante 4 dias, e elixir bucal Hexitol (Clorexidina HCL 0,12%), um elixir bucal antiséptico utilizado duas vezes ao dia a partir do segundo dia após a cirurgia durante 7 dias.

Avaliação pós-operatória Os examinadores que realizam as avaliações clínicas e radiográficas serão cegos para as atribuições dos grupos. Consultas de acompanhamento serão agendadas ao longo da primeira semana, bem como aos 3 meses e 6 meses pós-operatórios. Durante cada visita, os seguintes parâmetros serão avaliados:

1. Avaliações Clínicas:

   Medições da profundidade de sondagem e do índice de sangramento serão registadas na linha de base e aos 6 meses para avaliar a cicatrização dos tecidos moles peri-implantares. Os níveis de dor serão avaliados utilizando uma Escala Visual Analógica (EVA) no 1º, 3º e 7º dias pós-operatórios.

2. Avaliação Radiográfica:

A tomografia computorizada de feixe cónico (CBCT) será realizada na (linha de base) antes da colocação imediata do implante (IIP) para avaliar a espessura da placa labial do osso, e os pacientes serão expostos a outra CBCT após 6 meses da colocação do implante para avaliação das alterações na espessura da placa labial do osso. Leituras da espessura óssea serão medidas em três níveis diferentes: plataforma do implante (T0), 2 mm (T1) e (T2) 4 mm e perda óssea crestal ou perda óssea marginal. Análise estatística Os dados serão analisados e visualizados utilizando o software estatístico SAS JMP versão 17.2. As estatísticas descritivas serão apresentadas como média ± desvio padrão. Para comparar os resultados entre os grupos de controlo e estudo em cada ponto temporal individual, serão realizados testes T de Student independentes. Cada ponto temporal será analisado.