Timochinone Intorno all'Impianto Immediato (Thymoquinone)

Il posizionamento immediato di impianti dentali ha guadagnato popolarità per sostituire denti estratti grazie ai suoi vantaggi, tra cui tempi di trattamento più brevi, migliore preservazione del volume osseo alveolare e risultati estetici migliorati. Tuttavia, il successo degli impianti immediati dipende in gran parte dal raggiungimento di una osteointegrazione ottimale, definita come il legame strutturale e funzionale diretto tra osso vivente e la superficie di un impianto portante. Fattori come le proprietà della superficie dell'impianto, le tecniche chirurgiche e le variabili specifiche del paziente, inclusa la qualità ossea, influenzano questo processo.

Estese ricerche hanno mirato a migliorare il contatto osso-impianto (BIC), un fattore chiave per una osteointegrazione di successo. Le strategie includono la modifica della morfologia della superficie dell'impianto e l'applicazione di agenti bioattivi, entrambi intesi a migliorare il BIC e supportare l'integrazione a lungo termine dell'impianto.

Molti studi preclinici e clinici hanno documentato la rigenerazione di gap orizzontali inferiori a 2 mm in presenza di un coagulo di sangue stabile, ma quando la distanza del gap peri-impianto era superiore a 2 mm, si dovrebbe utilizzare un innesto osseo per sigillare questo difetto osseo.

La medicina erboristica ha attirato l'attenzione dei ricercatori per il trattamento delle malattie orali e parodontali grazie ai suoi effetti benefici, più sicuri, integrati, al costo ridotto e agli effetti collaterali minimi. La Nigella sativa (NS) è conosciuta come "seme nero", un fiore della pianta che cresce in Medio Oriente, in alcuni paesi asiatici e mediterranei.

La Timochinone (TQ) è uno dei principali componenti bioattivi della NS, ha un prezioso effetto terapeutico grazie alle sue proprietà antiossidanti, antimicrobiche, analgesiche, antinfiammatorie, antipertensive, antistaminiche, ipoglicemizzanti, epatoprotettive, anticarcinogeniche e immunostimolanti. Considerando le caratteristiche antinfiammatorie, antimicrobiche e antiossidanti della TQ, potrebbe svolgere un ruolo significativo nella prevenzione dell'inizio, progressione e trattamento delle malattie parodontali.

La NS e il suo principio attivo TQ sono stati utilizzati per il trattamento di ipertensione, cancro, artrite reumatoide, diabete, asma bronchiale, ipertensione, obesità, malattia di Behçet, danni epatici e altri disturbi metabolici e autoimmuni. Si è scoperto che la TQ è responsabile dell'effetto terapeutico della NS.

La NS e la TQ hanno mostrato abbondanti proprietà terapeutiche su diverse malattie e condizioni orali come carie dentali, medicazione intracanalare, ulcerazioni orali, mucosite, guarigione delle ferite, guarigione ossea post-estrazione, cancro orale, malattie gengivali e parodontali. Gli effetti della TQ in contesti associati a malattie parodontali e i loro modi d'azione con potenziali benefici per la terapia parodontale sono stati studiati in diverse ricerche. Questi includono studi in vitro, studi in vivo (animali) e studi clinici (RCT).

Il modo d'azione della TQ nelle malattie parodontali è l'attività antinfiammatoria e antiossidante attraverso la soppressione di citochine infiammatorie (IL-1b, IL-6, TNF-α, PGE), l'attivazione di IL-10 e la soppressione di NO. Le proprietà antibatteriche attraverso la soppressione della resistenza batterica e la disintegrazione delle membrane batteriche. Effetto modulatore sulle cellule staminali attraverso l'attivazione della migrazione delle cellule staminali e l'immunomodulazione delle cellule staminali e potenziali meccanismi rigenerativi di questi ricchi composti naturali.

Diversi studi hanno valutato l'effetto di diversi materiali gel attorno al posizionamento immediato di impianti, come gel di melatonina e acido ialuronico, Vitamina D topica attorno all'impianto immediato e gel di simvastatina.

A nostra conoscenza, non esiste uno studio umano che valuti l'effetto della TQ nella gestione della distanza del gap attorno al posizionamento immediato di impianti. Pertanto, l'obiettivo del presente studio era valutare l'effetto del gel topico di TQ attorno al posizionamento di impianti immediati sia clinicamente che radiograficamente.

Obiettivo dello studio Risultato primario: Valutare l'effetto dell'idrogel di TQ attorno al posizionamento immediato di impianti clinicamente e radiograficamente.

Risultato secondario: Confrontare l'effetto dell'idrogel di TQ con innesto osseo rispetto al solo innesto osseo attorno all'impianto clinicamente e radiograficamente.

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Pazienti e Metodi

Disegno dello studio:

Questo studio clinico controllato randomizzato sarà condotto su 44 pazienti. Tutti i pazienti saranno selezionati dalla clinica ambulatoriale del Dipartimento di Medicina Orale, Diagnosi Orale e Parodontologia. Facoltà di Odontoiatria, Università di Minia.

Calcolo della dimensione del campione:

La dimensione del campione è stata calcolata utilizzando G*Power (versione 3.1.9.7) per un ANCOVA (effetti fissi, inclusi effetti principali e interazioni) che confronta due gruppi mentre si aggiusta per una covariata. Assumendo una dimensione dell'effetto di f = 0.56 (parziale), con un disegno a due gruppi, un livello alfa (α) di 0.05 e una potenza (1-β) di 0.95, la dimensione totale del campione richiesta è di 44 partecipanti, che si suddivide in 22 partecipanti per gruppo. Con questa dimensione del campione, i gradi di libertà del denominatore sarebbero 41 (calcolati come N totale, numero di gruppi, numero di covariate: 44 - 2 - 1 = 41). Questa configurazione consente una potenza sufficiente per rilevare un effetto mentre si tiene conto della covariata.

Il piano di trattamento completo sarà spiegato a tutti i pazienti, inclusi passaggi dettagliati, rischi e risultati attesi, e il loro consenso firmato completo sarà ottenuto prima dell'ingresso nello studio. Lo studio sarà conforme alle regole stabilite dalle Linee Guida di Buona Pratica Clinica della Conferenza Internazionale sull'Armonizzazione, la Dichiarazione di Helsinki e il comitato etico di ricerca della Facoltà di Odontoiatria, Università di Minia.

Gruppi dello studio e randomizzazione Lo studio includerà 44 impianti immediati che sostituiscono denti posteriori non restaurabili. I pazienti sono stati assegnati casualmente in numero uguale a due gruppi utilizzando http://www.randomizer.org Gruppo I (Controllo): 22 impianti saranno inseriti immediatamente dopo l'estrazione dei denti con xenoinnesto.

Gruppo II (Studio): 22 impianti saranno inseriti immediatamente dopo l'estrazione dei denti, combinando xenoinnesto e gel di TQ.

Fase preoperatoria Esame clinico Dati personali, inclusi nome, età, genere, occupazione e informazioni di contatto, saranno raccolti per ogni paziente.

Verrà raccolta una storia medica e dentale dettagliata per escludere quelli con condizioni o abitudini che potrebbero influenzare negativamente la stabilità dell'impianto.

L'igiene orale sarà valutata e i pazienti saranno indirizzati al Dipartimento di Medicina Orale e Parodontologia per detartrasi e lucidatura. L'occlusione sarà valutata per garantire un allineamento e un contatto corretti.

La procedura chirurgica e le potenziali complicanze (es. sanguinamento, dolore, gonfiore, fallimento dell'impianto) saranno spiegate a ogni paziente. Fotografie e radiografie di follow-up saranno utilizzate per la documentazione e il monitoraggio della guarigione. Questi dati saranno raccolti per garantire che ogni paziente soddisfi i criteri di inclusione.

Preparazione del gel di TQ:

I niosomi caricati con TQ saranno preparati utilizzando il metodo di iniezione di etanolo (Mostafa et al.). La formulazione consisteva in Span 60, colesterolo, PEG 4000 e TQ in un rapporto di peso rispettivamente di 90:35:5:10. Per un lotto rappresentativo, saranno utilizzati 90 mg di Span 60, 35 mg di colesterolo, 5 mg di PEG 4000 e 20 mg di TQ. Span 60 e colesterolo saranno disciolti in 5 mL di etanolo assoluto (fase organica) e riscaldati delicatamente in un bagnomaria a 60-70 °C con agitazione fino a ottenere una soluzione limpida. Nel frattempo, PEG 4000 sarà disciolto in 10 mL di soluzione tampone fosfato preriscaldata (PBS, pH 7.4) per preparare la fase acquosa, che sarà mantenuta alla stessa temperatura della fase organica.

La soluzione lipidica etanolica sarà iniettata lentamente nella fase acquosa a una velocità di circa 0.5-1 mL per minuto sotto continua agitazione magnetica (800 rpm) mantenendo la temperatura a 60-70 °C. L'agitazione continuerà per ulteriori 20 minuti dopo il completamento dell'iniezione per garantire una corretta formazione delle vescicole. L'etanolo residuo sarà quindi rimosso per evaporazione rotativa sotto pressione ridotta fino a quando rimarrà una quantità trascurabile di solvente. La dispersione niosomiale risultante sarà quindi sonicata in un bagno di ghiaccio utilizzando un sonicatore a bagnomaria per 2 min per ridurre la dimensione delle particelle e ottenere una distribuzione uniforme. La Timochinone sarà incapsulata nei niosomi utilizzando l'approccio di post-inserzione. In breve, TQ (20 mg) sarà disciolta in 2 ml di etanolo e aggiunta alla sospensione niosomiale preformata sotto agitazione e incubata per 2 ore a 37 °C.

La timochinone non incapsulata sarà separata per ultracentrifugazione a 15000 rpm per 60 minuti a 4 °C, e il pellet niosomiale raccolto sarà risospeso in PBS al volume originale. I niosomi di timochinone purificati saranno conservati a 4 °C, protetti dalla luce, fino a ulteriore caratterizzazione.

L'efficienza di incapsulamento (EE%) è stata determinata quantificando la quantità di timochinone libera nel surnatante dopo la purificazione utilizzando un metodo UV-VIS validato. La lunghezza d'onda di rilevamento sarà impostata a 254 nm. L'EE% sarà calcolata utilizzando l'equazione EE% = [(Wt - Wf) / Wt] × 100, dove Wt è la timochinone totale aggiunta e Wf è la quantità di farmaco libero rilevata nel surnatante.

I niosomi preparati saranno caratterizzati per la loro dimensione media delle particelle, indice di polidispersità (PDI) e potenziale zeta utilizzando tecniche di scattering di luce dinamico ed elettroforetico (DLS/ELS) a 25 °C. I campioni sono stati diluiti 20-100 volte in PBS prima della misurazione. Ogni misurazione sarà eseguita in triplicato e i risultati saranno espressi come media ± DS. La morfologia superficiale dei niosomi sarà esaminata mediante microscopia elettronica a scansione (SEM). Una goccia di dispersione niosomiale diluita sarà posta su uno stub di alluminio, essiccata all'aria sotto vuoto, rivestita mediante sputtering con un sottile strato di oro-palladio (≈5 nm) e immaginata a una tensione di accelerazione di 5-15 kV.

Lo studio di stabilità alla luce sarà condotto per valutare la fotostabilità della TQ all'interno del sistema niosomiale. Aliquote di farmaco libero e dispersione niosomiale (5 mL ciascuna) saranno conservate in flaconi di vetro trasparente esposti alla luce UV a 25 ± 2 °C, e le analisi saranno eseguite a intervalli di tempo prestabiliti per il contenuto di farmaco. La percentuale di TQ rimanente sarà tracciata contro il tempo per valutare la fotostabilità dei niosomi.

Fase chirurgica:

1. Le procedure chirurgiche saranno eseguite seguendo rigorosi protocolli di controllo delle infezioni. Ai pazienti sarà istruito di sciacquarsi con clorexidina allo 0.1% (collutorio antisettico Hexitol, Arabian Drug Company (ADCO), Il Cairo, Egitto) e i tessuti peri-orali saranno disinfettati con povidone-iodio (Betadine, Nile Co. per Pharma, Il Cairo, Egitto).
2. L'anestesia locale sarà iniettata tramite la tecnica di infiltrazione o blocco nervoso utilizzando cloridrato di articaina al 4% con adrenalina 1:100.000 (Artinibsa, Inibsa Dental SLU, Spagna).
3. Saranno eseguite estrazioni dentali atraumatiche, preservando l'osso alveolare. Le dimensioni dell'alveolo di estrazione e dell'osso residuo saranno valutate utilizzando una sonda parodontale, oltre a misurare la larghezza e la lunghezza della radice del dente estratto, per garantire una selezione appropriata dell'impianto. Le misurazioni saranno prese per confermare la compatibilità con la dimensione pianificata dell'impianto e garantire un posizionamento corretto.
4. La perforazione osteotomica ha seguito un protocollo standardizzato, utilizzando frese sequenziali e coppia e velocità adeguate sotto abbondante irrigazione.
5. Nel gruppo di controllo, lo xenoinnesto sarà applicato sia sulla superficie dell'impianto che sul sito osteotomico dopo il posizionamento dell'impianto.

Mentre nel gruppo di studio, xenoinnesto miscelato con gel di TQ sarà inserito attorno all'impianto.

Fase post-chirurgica:- Istruzioni post-chirurgiche Dopo l'intervento, i pazienti riceveranno istruzioni dettagliate per la cura post-operatoria e farmaci prescritti inclusi compresse Cataflam 50 mg (Diclofenac potassico) un farmaco antinfiammatorio non steroideo assunto due volte al giorno per 4 giorni e collutorio Hexitol (Clorexidina HCL 0.12%) un collutorio antisettico utilizzato due volte al giorno a partire dal secondo giorno dopo l'intervento per 7 giorni.

Valutazione post-operatoria Gli esaminatori che eseguono le valutazioni cliniche e radiografiche saranno in cieco rispetto alle assegnazioni dei gruppi. Appuntamenti di follow-up saranno programmati durante la prima settimana, nonché a 3 mesi e 6 mesi post-operatori. Durante ogni visita, i seguenti parametri saranno valutati:

1. Valutazioni Cliniche:

   La profondità di sondaggio e le misurazioni dell'indice di sanguinamento saranno registrate al basale e a 6 mesi per valutare la guarigione dei tessuti molli peri-impianto. I livelli di dolore saranno valutati utilizzando una Scala Analogica Visiva (VAS) il 1°, 3° e 7° giorno post-operatori.

2. Valutazione Radiografica:

Una tomografia computerizzata a fascio conico (CBCT) sarà eseguita al (baseline) prima del posizionamento immediato dell'impianto (IIP) per valutare lo spessore della lamina ossea labiale e i pazienti saranno esposti a un'altra CBCT dopo 6 mesi dal posizionamento dell'impianto per la valutazione dei cambiamenti nello spessore della lamina ossea labiale. Le letture dello spessore osseo saranno misurate a tre diversi livelli: piattaforma dell'impianto (T0), 2mm (T1) e (T2) 4mm e perdita ossea crestale o perdita ossea marginale. Analisi statistica I dati saranno analizzati e visualizzati utilizzando il software statistico SAS JMP versione 17.2. Le statistiche descrittive saranno presentate come media ± deviazione standard. Per confrontare gli esiti tra il gruppo di controllo e il gruppo di studio in ogni singolo punto temporale, saranno eseguiti test T di Student indipendenti. Ogni punto temporale sarà analizzato.