Thymochinon Kolem Okamžitého Implantátu (Thymoquinone)

Okamžitá dentální implantace získala na popularitě pro náhradu extrahovaných zubů díky svým výhodám, včetně kratší doby léčby, lepšího zachování objemu alveolární kosti a vylepšených estetických výsledků. Nicméně úspěch okamžitých implantátů do značné míry závisí na dosažení optimální osteointegrace, definované jako přímá strukturální a funkční vazba mezi živou kostí a povrchem implantátu přenášejícího zátěž. Faktory jako vlastnosti povrchu implantátu, chirurgické techniky a pacientem specifické proměnné, včetně kvality kosti, tento proces ovlivňují.

Rozsáhlý výzkum si kladl za cíl zlepšit kontakt kosti s implantátem (BIC), klíčový faktor pro úspěšnou osteointegraci. Strategie zahrnují modifikaci morfologie povrchu implantátu a aplikaci bioaktivních látek, obojí má za cíl zlepšit BIC a podpořit dlouhodobou integraci implantátu.

Mnoho preklinických a klinických studií dokumentovalo regeneraci horizontálních mezer menších než 2 mm za přítomnosti stabilní krevní sraženiny, ale když byla vzdálenost periimplantátové mezery větší než 2 mm, měl by být použit kostní štěp k uzavření tohoto kostního defektu.

Bylinná medicína získala pozornost výzkumníků pro léčbu orálních a parodontálních onemocnění díky svým příznivým, bezpečnějším, integrovaným účinkům, sníženým nákladům a minimálním vedlejším účinkům. Nigella sativa (NS) je známá jako "černý kmín", květina rostliny, která roste na Středním východě, v některých asijských a středomořských zemích.

Thymochinon (TQ) je jednou z hlavních bioaktivních složek NS, má cenný terapeutický účinek díky svým antioxidačním, antimikrobiálním, analgetickým, protizánětlivým, antihypertenzivním, antihistaminickým, hypoglykemickým, hepatoprotektivním, antikarcinogenním a imunitně aktivujícím vlastnostem. Vzhledem k protizánětlivým, antimikrobiálním a antioxidačním charakteristikám TQ může hrát významnou roli v prevenci vzniku, progrese a léčbě parodontálních onemocnění.

NS a její aktivní složka TQ byly použity k léčbě hypertenze, rakoviny, revmatoidní artritidy, diabetu, bronchiálního astmatu, hypertenze, obezity, Behcetovy choroby, poškození jater a dalších metabolických a autoimunitních poruch. Bylo zjištěno, že TQ je zodpovědný za terapeutický účinek NS.

NS a TQ prokázaly bohaté terapeutické vlastnosti u různých orálních onemocnění a stavů, jako je zubní kaz, intrakanační medikace, orální ulcerace, mukozitida, hojení ran, hojení kosti po extrakci, orální karcinom, gingivální a parodontální onemocnění. Účinky TQ v souvislosti s parodontálním onemocněním a jejich mechanismy účinku s potenciálními přínosy pro parodontální terapii byly zkoumány v několika studiích. Patří mezi ně in vitro studie, in vivo (zvířecí) studie a klinické studie (RCT).

Mechanismus účinku TQ u parodontálních onemocnění spočívá v protizánětlivé a antioxidační aktivitě prostřednictvím potlačení zánětlivých cytokinů (IL-1b, IL-6, TNF-α, PGE), aktivace IL-10 a potlačení NO. Antibakteriální vlastnosti prostřednictvím potlačení bakteriální rezistence a dezintegrace bakteriálních membrán. Modulační účinek na kmenové buňky prostřednictvím aktivace migrace kmenových buněk a imunomodulace kmenových buněk a potenciálně regenerační mechanismy těchto bohatých přírodních sloučenin.

Různé studie hodnotily účinek různých gelových materiálů kolem okamžité implantace, jako jsou gely s melatoninem a kyselinou hyaluronovou, topický vitamín D kolem okamžitého implantátu a gel se simvastatinem.

Podle našich znalostí neexistuje žádná lidská studie, která by hodnotila účinek TQ na zvládání vzdálenosti mezery kolem okamžité implantace. Cílem této studie bylo tedy vyhodnotit účinek topického gelu TQ kolem okamžitých implantátů klinicky i radiograficky.

Cíl studie Primární výsledek: Vyhodnotit účinek hydrogelu TQ kolem okamžité implantace klinicky a radiograficky.

Sekundární výsledek: Porovnat účinek hydrogelu TQ s kostním štěpem ve srovnání pouze s kostním štěpem kolem implantátu klinicky a radiograficky.

Pacienti a Metody

Design studie:

Tato randomizovaná kontrolovaná klinická studie bude provedena na 44 pacientech. Všichni pacienti budou vybráni z ambulance oddělení orální medicíny, orální diagnostiky a parodontologie. Fakulta zubního lékařství, Minia University.

Výpočet velikosti vzorku:

Velikost vzorku byla vypočtena pomocí G*Power (verze 3.1.9.7) pro ANCOVA (pevné efekty, včetně hlavních efektů a interakcí), která porovnává dvě skupiny s úpravou pro jednu kovariátu. Za předpokladu velikosti efektu f = 0,56 (částečné), s dvouskupinovým designem, hladinou alfa (α) 0,05 a silou (1-β) 0,95 je požadovaná celková velikost vzorku 44 účastníků, což se dělí na 22 účastníků na skupinu. S touto velikostí vzorku by stupně volnosti jmenovatele byly 41 (vypočteno jako celkový N, počet skupin, počet kovariát: 44 - 2 - 1 = 41). Toto nastavení umožňuje dostatečnou sílu k detekci efektu při zohlednění kovariáty.

Kompletní léčebný plán bude vysvětlen všem pacientům včetně podrobných kroků, rizik a očekávaných výsledků a jejich plný podepsaný souhlas bude získán před vstupem do studie. Studie bude v souladu s pravidly stanovenými Mezinárodní konferencí o harmonizaci Směrnic pro správnou klinickou praxi, Helsinskou deklarací a výzkumnou etickou komisí Fakulty zubního lékařství, Minia University.

Studijní skupiny a randomizace Studie bude zahrnovat 44 okamžitých implantátů nahrazujících neobnovitelné zadní zuby. Pacienti byli náhodně přiděleni ve stejném počtu do dvou skupin pomocí http://www.randomizer.org Skupina I (Kontrolní): 22 implantátů bude vloženo bezprostředně po extrakci zubů s xenograftem.

Skupina II (Studijní): 22 implantátů bude vloženo bezprostředně po extrakci zubů, kombinovaný xenograft a gel TQ.

Preoperační fáze Klinické vyšetření Osobní údaje, včetně jména, věku, pohlaví, zaměstnání a kontaktních informací, budou shromážděny pro každého pacienta.

Bude provedena podrobná lékařská a zubní anamnéza, aby byli vyloučeni ti se stavy nebo návyky, které by mohly negativně ovlivnit stabilitu implantátu.

Bude posouzena ústní hygiena a pacienti budou odesláni na oddělení orální medicíny a parodontologie pro scaling a leštění. Bude vyhodnocena okluze, aby bylo zajištěno správné zarovnání a kontakt.

Chirurgický postup a možné komplikace (např. krvácení, bolest, otok, selhání implantátu) budou vysvětleny každému pacientovi. Fotografie a kontrolní rentgenové snímky budou použity pro dokumentaci a sledování hojení. Tyto údaje budou shromážděny, aby bylo zajištěno, že každý pacient splní kritéria zařazení.

Příprava gelu TQ:

TQ-niosomy budou připraveny pomocí metody etanolové injekce (Mostafa et al.). Formulace se skládala ze Span 60, cholesterolu, PEG 4000 a TQ v hmotnostním poměru 90:35:5:10. Pro reprezentativní šarži bude použito 90 mg Span 60, 35 mg cholesterolu, 5 mg PEG 4000 a 20 mg TQ. Span 60 a cholesterol budou rozpuštěny v 5 ml absolutního ethanolu (organická fáze) a jemně zahřívány ve vodní lázni při 60-70 °C za míchání, dokud nebude získána čirá roztok. Mezitím bude PEG 4000 rozpuštěn v 10 ml předehřátého fosfátem puštěného fyziologického roztoku (PBS, pH 7,4) pro přípravu vodné fáze, která bude udržována na stejné teplotě jako organická fáze.

Ethanolic lipid solution will be injected slowly into the aqueous phase at a rate of approximately 0.5-1 mL per minute under continuous magnetic stirring (800 rpm) while maintaining the temperature at 60-70 °C. Míchání bude pokračovat dalších 20 minut po dokončení injekce, aby bylo zajištěno správné vytvoření vezikul. Zbytkový ethanol bude poté odstraněn rotační evaporací za sníženého tlaku, dokud nezůstane zanedbatelné množství rozpouštědla. Výsledná niosomální disperze bude poté sonikována v ledové lázni pomocí vodní lázňové sonikátory po dobu 2 minut, aby se snížila velikost částic a dosáhlo rovnoměrného rozložení. Thymochinon bude zapouzdřen do niosomů pomocí přístupu post insertion. Stručně řečeno, TQ (20 mg) bude rozpuštěno do 2 ml ethanolu a přidáno k předem připravené niosomální suspenzi za míchání a inkubováno po dobu 2 hodin při 37 °C.

Nezapouzdřený thymochinon bude oddělen ultracentrifugací při 15000 ot./min po dobu 60 minut při 4 °C a sebraný niosomální pellet bude resuspendován v PBS na původní objem. Purifikované thymochinonové niosomy budou skladovány při 4 °C, chráněny před světlem, až do další charakterizace.

Efektivita zapouzdření (EE%) byla stanovena kvantifikací množství volného thymochinonu v supernatantu po purifikaci pomocí validované UV-VIS metody. Detekční vlnová délka bude nastavena na 254 nm. EE% bude vypočteno pomocí rovnice EE% = [(Wt - Wf) / Wt] × 100, kde Wt je celkový přidaný thymochinon a Wf je množství volného léčiva detekovaného v supernatantu.

Připravené niosomy budou charakterizovány na jejich střední velikost částic, index polydisperzity (PDI) a zeta potenciál pomocí dynamických a elektroforetických technik rozptylu světla (DLS/ELS) při 25 °C. Vzorky byly před měřením 20-100krát zředěny v PBS. Každé měření bude provedeno trojnásobně a výsledky budou vyjádřeny jako průměr ± SD. Povrchová morfologie niosomů bude vyšetřena skenovací elektronovou mikroskopií (SEM). Kapka zředěné niosomální disperze bude umístěna na hliníkový pahýl, vysušena na vzduchu pod vakuem, postříkána tenkou vrstvou zlato-palladia (≈5 nm) a snímána při zrychlujícím napětí 5-15 kV.

Studie světelné stability bude provedena k vyhodnocení fotostability TQ v niosomálním systému. Alikvoty volného léčiva a niosomální disperze (každá 5 ml) budou skladovány v čirých skleněných lahvičkách vystavených UV světlu při 25 ± 2 °C a analýzy budou provedeny v předem stanovených časových intervalech pro obsah léčiva. Procento zbývajícího TQ bude vyneseno proti času k posouzení fotostability niosomů.

Chirurgická fáze:

1. Chirurgické výkony budou prováděny v souladu s přísnými protokoly kontroly infekce. Pacientům bude nařízeno vypláchnout si ústa 0,1% chlorhexidinem (Hexitol antiseptická ústní voda, Arabian Drug Company (ADCO), Káhira, Egypt) a peri-orální tkáně budou dezinfikovány povidon-jodem (Betadine, Nile Co. for Pharma, Káhira, Egypt).
2. Lokální anestézie bude aplikována infiltrační nebo nervovou blokádou pomocí 4% hydrochloridu artikainu s 1:100 000 epinefrinu (Artinibsa, Inibsa Dental SLU, Španělsko).
3. Budou provedeny atraumtické extrakce zubů s uchováním alveolární kosti. Rozměry extrakčního lůžka a zbytkové kosti budou vyhodnoceny pomocí parodontální sondy, kromě měření šířky a délky kořene extrahovaného zubu, aby bylo zajištěno vhodné vybrání implantátu. Měření budou provedena pro potvrzení kompatibility s plánovanou velikostí implantátu a zajištění správného umístění.
4. Vrtání osteotomie následovalo standardizovaný protokol s použitím sekvenčních vrtáků a adekvátního točivého momentu a rychlosti pod hojnou irrigací.
5. V kontrolní skupině bude xenograft aplikován jak na povrch implantátu, tak na místo osteotomie po umístění implantátu.

Zatímco ve studijní skupině bude kolem implantátu vložen xenograft smíchaný s gelem TQ.

Pooperační fáze: - Pooperační instrukce Po operaci pacienti obdrží podrobné pokyny pro pooperační péči a předepsané léky včetně tablet Cataflam 50 mg (diklofenak draselný), nesteroidní protizánětlivý lék užívaný dvakrát denně po dobu 4 dnů, a ústní vody Hexitol (chlorhexidin HCL 0,12%), antiseptické ústní vody používané dvakrát denně počínaje druhým dnem po operaci po dobu 7 dnů.

Pooperační vyhodnocení Zkoušející provádějící klinická a radiografická hodnocení budou zaslepeni ohledně zařazení do skupin. Kontrolní návštěvy budou naplánovány během prvního týdne, stejně jako 3 měsíce a 6 měsíců po operaci. Během každé návštěvy budou hodnoceny následující parametry:

1. Klinická hodnocení:

   Hloubka sondáže a index krvácení budou zaznamenány na začátku a po 6 měsících k posouzení hojení periimplantátových měkkých tkání. Úroveň bolesti bude hodnocena pomocí vizuální analogové škály (VAS) 1., 3. a 7. den po operaci.

2. Radiografické hodnocení:

Kónický paprskový výpočetní tomografie (CBCT) bude pořízen (na začátku) před okamžitou implantací (IIP) k posouzení tloušťky labiální destičky kosti a pacienti budou vystaveni dalšímu CBCT po 6 měsících po implantaci pro vyhodnocení změn v tloušťce labiální destičky kosti. Měření tloušťky kosti budou provedena na třech různých úrovních: implantátová platforma (T0), 2 mm (T1) a (T2) 4 mm a ztráta kostního hřebene nebo marginální ztráta kosti. Statistická analýza Data budou analyzována a vizualizována pomocí statistického softwaru SAS JMP verze 17.2. Popisná statistika bude prezentována jako průměr ± směrodatná odchylka. Pro porovnání výsledků mezi kontrolní a studijní skupinou v každém jednotlivém časovém bodě budou provedeny nezávislé Studentovy T-testy. Každý časový bod bude analyzován.