Влияние диодного лазера на бактериемию, связанную с лоскутной хирургией пародонта: клинико-микробиологическое исследование

ИСТОЧНИК ДАННЫХ Пациенты, посещающие амбулаторное отделение отделения пародонтологии Колледжа стоматологических наук и больницы Кришнадеварая, будут проверены и случайным образом отобраны для исследования в соответствии с критериями включения и исключения. Подходящие субъекты будут проинформированы о характере и преимуществах участия в исследовании, и будет получено письменное подписанное согласие. Исследуемая популяция будет состоять из двадцати (n = 20) субъектов, которые будут соответствовать возрасту (от 30 до 40 лет) и полу.

Размер выборки Исследование было выполнено в соответствии с дизайном разделенного рта, и все зубы во рту обрабатывались случайным образом, используя либо левую, либо правую сторону верхней и нижней челюсти для контроля и противоположную сторону для терапии. Каждый пациент был включен в клинический протокол, состоящий из двух различных методов лечения.

I группа (n=10) - основная группа (диодный лазер + лоскутная операция) II группа (n=10) - контрольная группа (лоскутная операция)

ХИРУРГИЧЕСКАЯ ПРОЦЕДУРА ГРУППА I (ТЕСТ-ГРУППА) Пациенту будет предложено прополоскать рот 0,2% раствором хлоргексидина. После введения местной анестезии 2% гидрохлоридом лигнокаина (с адреналином 1: 80 000) будет проводиться лазерная аппликация с помощью диодного лазера 810 нм (ARC LASER FoxTM) с гибким оптическим наконечником 300 мкм. Бороздки будут подвергаться лазерному облучению повторяющимся лучом (0,2 с при выключении 0,3 с) при выходной мощности 1,0 Вт.

Интракревикулярный разрез будет выполнен с помощью хирургического лезвия 15c Bard Parker, слизисто-надкостничный лоскут на всю толщину будет приподнят.

Будет проведена санация грануляционной ткани, и лоскут будет сшит обратно на место с помощью черного шелкового шва 3-0, участок будет покрыт пародонтальной повязкой без эвгенола для защиты.

Послеоперационные инструкции будут даны пациенту. 2 мл крови берут на исходном уровне (образец 1), через 5 минут (образец 2) и в течение 20–30 минут (образец 3) после начала процедуры.

ГРУППА II (КОНТРОЛЬНАЯ ГРУППА) Пациенту будет предложено прополоскать рот 0,2% раствором хлоргексидина. После введения местной анестезии 2% лигнокаина гидрохлорида (с адреналином 1:80 000) внутрикревикулярный разрез будет сделан с помощью хирургического лезвия 15c Bard Parker, слизисто-надкостничный лоскут на всю толщину будет приподнят.

Будет проведена санация грануляционной ткани, и лоскут будет сшит обратно на место с помощью черного шелкового шва 3-0, участок будет покрыт пародонтальной повязкой без эвгенола для защиты.

Послеоперационные инструкции будут даны пациенту. 2 мл крови будут взяты на исходном уровне (образец 1), через 5 минут (образец 2) и в течение 20–30 минут (образец 3) после начала процедуры.

Сбор образцов крови Шесть миллилитров (6 мл) образцов крови будут взяты у пациента через антекубитальную вену с использованием строгой асептической техники через стерильную пластиковую канюлю 22-го калибра и отправлены для количественного ПЦР-анализа для количественного определения общей бактериальной нагрузки.

ПЦР-АНАЛИЗ Полимеразная цепная реакция (ПЦР) представляет собой лабораторный метод репликации ДНК, который позволяет селективно амплифицировать «целевую» последовательность ДНК. ПЦР включает ферментативную амплификацию ДНК, опосредованную праймерами. В этом исследовании проводится количественная полимеразная цепная реакция.

• ДНК из образцов крови будет извлечена с использованием набора QIAamp DNA Blood Mini Kit в соответствии с рекомендациями производителя.
• Для количественной оценки общей бактериальной нагрузки будет проведена количественная ПЦР с использованием универсального праймера для гена рибосомной РНК 16S.
• Анализ проводили в общем объеме крови 6 мл.
• Образцы для количественной ПЦР распределяют в луночные планшеты, запечатывают и центрифугируют.
• Амплификация будет выполнена, настройки для qPCR будут следующими: 95 градусов по Цельсию в течение 10 минут, затем 40 циклов амплификации при 95 градусах по Цельсию в течение 1 минуты, 52 градуса по Цельсию в течение 1 минуты, 72 градуса по Цельсию в течение 1 минуты.
• После каждого цикла продукты ПЦР будут отслеживаться на предмет увеличения флуоресценции SYBR green.
• Все измерения будут выполняться в трех экземплярах как для теста, так и для контроля.
• Для отрицательного контроля вместо клинического образца будет использоваться сверхчистая вода.
• Для определения специфичности амплифицированных продуктов будет получена кривая плавления от 60 до 95 градусов по Цельсию с непрерывным измерением флуоресценции при каждом повышении температуры на 1%.
• Сбор и анализ данных будут выполняться с использованием программного обеспечения ABI 7500.

Статистический анализ. Данные будут подвергнуты тесту на нормальность. Будет выполнен лучший параметрический или непараметрический тест данных. Значение P <0,05 будет считаться статистически значимым.