Effetto del laser a diodi sulla batteriemia associata alla chirurgia del lembo parodontale: uno studio clinico-microbiologico

FONTE DEI DATI Il paziente che visita la sezione ambulatoriale del Dipartimento di Parodontologia, il Krishnadevaraya College of Dental Sciences and Hospital sarà sottoposto a screening e reclutato in modo casuale per lo studio secondo i criteri di inclusione ed esclusione. I soggetti ammissibili saranno informati della natura e dei benefici della partecipazione allo studio e sarà ottenuto un consenso scritto firmato. La popolazione dello studio sarà composta da venti (n=20) soggetti di età (da 30 a 40 anni) e sesso abbinati.

Dimensione del campione Lo studio è stato eseguito secondo il disegno split-mouth e tutti i denti della bocca sono stati trattati in modo casuale utilizzando il lato sinistro o destro della mascella e della mandibola per il controllo e il lato opposto per la terapia. Ogni paziente è stato inserito in un protocollo clinico costituito da due diverse modalità di trattamento.

Gruppo I (n=10) - Gruppo test (laser a diodi + chirurgia con lembo) Gruppo II (n=10) - Gruppo di controllo (chirurgia con lembo)

PROCEDURA CHIRURGICA GRUPPO I (GRUPPO DI TEST) Al paziente verrà chiesto di risciacquare con collutorio a base di clorexidina allo 0,2%. Dopo la somministrazione di anestesia locale cloridrato di lignocaina al 2% (con epinefrina 1:80.000), verrà eseguita l'applicazione del laser, con l'ausilio di un laser a diodi da 810 nm (A.R.C LASER FoxTM) con una punta ottica flessibile di 300µm. I solchi saranno laserati con un raggio ripetuto (0.2 sec on 0.3 sec off) ad una potenza di uscita di 1.0 W.

L'incisione intracrevicolare sarà praticata con l'aiuto della lama chirurgica Bard Parker 15c, il lembo mucoperiosteo a tutto spessore sarà sollevato.

Verrà eseguito lo sbrigliamento del tessuto di granulazione e il lembo verrà suturato in posizione utilizzando una sutura di seta impanata nera 3-0, il sito sarà coperto con medicazione parodontale priva di eugenolo per la protezione.

Le istruzioni postoperatorie saranno fornite al paziente. Saranno raccolti 2 ml di sangue al basale (campione 1), a 5 minuti (campione 2) ed entro 20-30 minuti (campione 3) dall'inizio della procedura.

GRUPPO II (GRUPPO DI CONTROLLO) Al paziente verrà chiesto di risciacquare con collutorio a base di clorexidina allo 0,2%. Dopo la somministrazione di anestesia locale al 2% di lidocaina cloridrato (con 1:80.000 di epinefrina), verrà praticata un'incisione intracrevicolare con l'aiuto di una lama chirurgica Bard Parker 15c, verrà sollevato il lembo mucoperiostale a tutto spessore.

Verrà eseguito lo sbrigliamento del tessuto di granulazione e il lembo verrà suturato in posizione utilizzando una sutura di seta impanata nera 3-0, il sito sarà coperto con medicazione parodontale priva di eugenolo per la protezione.

Le istruzioni postoperatorie saranno fornite al paziente. Verranno raccolti 2 ml di sangue al basale (campione 1), a 5 minuti (campione 2) ed entro 20-30 minuti (campione 3) dall'inizio della procedura

Raccolta di campioni di sangue Sei millilitri (6 ml) di campioni di sangue verranno prelevati dal paziente attraverso una vena antecubitale utilizzando una rigorosa tecnica asettica tramite una cannula di plastica sterile di calibro 22 e inviati per l'analisi qPCR per quantificare la carica batterica totale.

ANALISI PCR La reazione a catena della polimerasi (PCR) è una tecnica di laboratorio per la replicazione del DNA che consente di amplificare selettivamente la sequenza di DNA "bersaglio". La PCR prevede l'amplificazione enzimatica del DNA mediata da primer. In questo studio viene eseguita la reazione a catena della polimerasi quantitativa.

• Il DNA dai campioni di sangue verrà estratto utilizzando il kit QIAamp DNA Blood Mini secondo le raccomandazioni del produttore.
• Per quantificare la carica batterica totale, sarà effettuata una qPCR utilizzando un primer universale per il gene dell'RNA ribosomiale 16S.
• L'analisi è stata eseguita in un volume totale di 6 ml di sangue.
• I campioni per qPCR saranno dispensati in piastre a pozzetti, sigillati e centrifugati.
• Verrà eseguita l'amplificazione, le impostazioni per qPCR saranno le seguenti: 95 gradi centigradi per 10 minuti seguiti da 40 cicli di amplificazione a 95 gradi centigradi per 1 minuto, 52 gradi centigradi per 1 minuto, 72 gradi centigradi per 1 minuto.
• Dopo ogni ciclo, i prodotti di PCR saranno monitorati per l'aumento della fluorescenza del SYBR green.
• Tutte le misurazioni saranno eseguite in triplicato sia per il test che per i controlli.
• Per il controllo negativo verrà utilizzata acqua ultrapura al posto del campione clinico.
• Per determinare la specificità dei prodotti amplificati, sarà ottenuta una curva di melting da 60 gradi centigradi a novantacinque gradi centigradi, con misurazione continua della fluorescenza ad ogni aumento dell'1% della temperatura.
• L'acquisizione e l'analisi dei dati saranno effettuate utilizzando il software ABI 7500.

Analisi statistica I dati saranno sottoposti a test di normalità. Verrà eseguito il miglior test parametrico o non parametrico sui dati. Il valore P <0,05 sarà considerato statisticamente significativo.