Efecto del Láser de Diodo en la Bacteriemia Asociada a la Cirugía de Colgajo Periodontal: Estudio Clínico-Microbiológico

FUENTE DE DATOS Los pacientes que visiten la Sección de Pacientes Ambulatorios del Departamento de Periodoncia, Krishnadevaraya College of Dental Sciences and Hospital serán evaluados y reclutados aleatoriamente para el estudio según los criterios de inclusión y exclusión. Los sujetos elegibles serán informados de la naturaleza y los beneficios de la participación en el estudio y se obtendrá un consentimiento firmado por escrito. La población de estudio consistirá en veinte (n=20) sujetos que serán emparejados por edad (30 a 40 años) y sexo.

Tamaño de la muestra El estudio se realizó de acuerdo con un diseño de boca dividida y todos los dientes de la boca se trataron aleatoriamente usando el lado izquierdo o derecho del maxilar y la mandíbula para el control y el lado opuesto para la terapia. Cada paciente se inscribió en un protocolo clínico que constaba de dos modalidades de tratamiento diferentes.

Grupo I (n=10) - Grupo de prueba (láser de diodo + cirugía de colgajo) Grupo II (n=10) - Grupo de control (cirugía de colgajo)

PROCEDIMIENTO QUIRÚRGICO GRUPO I (GRUPO DE PRUEBA) Se le pedirá al paciente que se enjuague con enjuague bucal con clorhexidina al 0,2%. Tras la administración de anestesia local clorhidrato de lidocaína al 2% (con epinefrina 1:80.000), se realizará la aplicación del Láser, con la ayuda de láser de diodo de 810 nm (A.R.C LASER FoxTM) con punta óptica flexible de 300µm. El surco se aplicará láser con un haz repetido (0,2 segundos encendido, 0,3 segundos apagado) con una potencia de salida de 1,0 W.

Se realizará una incisión intracrevicular con la ayuda de un bisturí Bard Parker de 15c, se elevará un colgajo mucoperióstico de espesor total.

Se realizará el desbridamiento del tejido de granulación y se suturará el colgajo en su posición con sutura de seda negra empanizada 3-0, el sitio se cubrirá con un apósito periodontal sin eugenol para su protección.

Se darán instrucciones postoperatorias al paciente. Se recolectarán 2 ml de sangre al inicio (muestra 1), a los 5 minutos (muestra 2) y dentro de los 20-30 minutos (muestra 3) de comenzar el procedimiento.

GRUPO II (GRUPO DE CONTROL) Se le pedirá al paciente que se enjuague con enjuague bucal con clorhexidina al 0,2%. Después de la administración de clorhidrato de lidocaína al 2 % (con epinefrina 1:80 000), se realizará una incisión intracravicular con la ayuda de un bisturí Bard Parker de 15c y se levantará un colgajo mucoperióstico de espesor completo.

Se realizará el desbridamiento del tejido de granulación y se suturará el colgajo en su posición con sutura de seda negra empanizada 3-0, el sitio se cubrirá con un apósito periodontal sin eugenol para su protección.

Se darán instrucciones postoperatorias al paciente. Se recolectarán 2 ml de sangre al inicio (muestra 1), a los 5 minutos (muestra 2) y dentro de los 20-30 minutos (muestra 3) de comenzar el procedimiento

Recolección de muestras de sangre Se extraerán seis mililitros (6 ml) de muestras de sangre del paciente a través de una vena antecubital utilizando una técnica aséptica estricta a través de una cánula de plástico estéril de calibre 22 y se enviarán para análisis qPCR para cuantificar la carga bacteriana total.

ANÁLISIS POR PCR La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de laboratorio para la replicación del ADN que permite amplificar selectivamente la secuencia de ADN "objetivo". La PCR implica la amplificación enzimática del ADN mediada por cebadores. En este estudio se realiza la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa.

• El ADN de las muestras de sangre se extraerá con el QIAamp DNA Blood Mini Kit de acuerdo con las recomendaciones del fabricante.
• Para cuantificar la carga bacteriana total se realizará qPCR utilizando un cebador universal al gen del ARN ribosomal 16S.
• El análisis se realizó en un volumen total de 6 ml de sangre.
• Las muestras para qPCR se dispensarán en placas de pocillos, selladas y centrifugadas.
• Se realizará la amplificación, los ajustes para qPCR serán los siguientes: 95 grados centígrados durante 10 minutos seguidos de 40 ciclos de amplificación a 95 grados centígrados durante 1 minuto, 52 grados centígrados durante 1 minuto, 72 grados centígrados durante 1 minuto.
• Después de cada ciclo, los productos de PCR se monitorearán para detectar el aumento de la fluorescencia de SYBR green.
• Todas las mediciones se realizarán por triplicado tanto para la prueba como para los controles.
• Para el control negativo se utilizará agua ultrapura en sustitución de la muestra clínica.
• Para determinar la especificidad de los productos amplificados, se obtendrá una curva de fusión de 60 grados centígrados a noventa y cinco grados centígrados, con medición continua de la fluorescencia a cada 1% de aumento de temperatura.
• La adquisición y el análisis de datos se realizarán utilizando el software ABI 7500.

Análisis estadístico Los datos serán sometidos a prueba de normalidad. Se realizará la mejor prueba paramétrica o no paramétrica de los datos. Se considerará estadísticamente significativo un valor de p < 0,05.