Влияние микроРНК грудного молока на микробиоту кишечника младенцев (MiMilk)

Первые 1000 дней жизни – критический период, вносящий существенный вклад в программирование здоровья человека. Становится все более очевидным, что создание здоровой микробиоты кишечника (ГМ) играет важную роль в предотвращении как краткосрочных, так и долгосрочных проблем со здоровьем.

Среди факторов, влияющих на формирование микробиоты кишечника ребенка, основополагающую роль играет грудное молоко (ГМ). В отличие от молочных смесей, грудное молоко содержит микроРНК, которые являются потенциальными медиаторами взаимодействия между хозяином и микробиотой. Таким образом, мы предполагаем, что микроРНК из грудного молока могут присутствовать в содержимом просвета младенца и взаимодействовать с его микробиотой, тем самым модулируя ее.

Основная цель: изучить влияние грудного молока на состав фекальных микроРНК у младенцев.

Первичный критерий оценки: Профили и количество микроРНК в разные моменты времени (D10, D30, D60, M6 и M12) в стуле детей, находящихся исключительно на грудном вскармливании, по сравнению с детьми, вскармливаемыми молочной смесью.

Второстепенные цели:

Изучите влияние микроРНК из грудного молока на состав фекальной микробиоты ребенка с учетом мешающих факторов окружающей среды, включая состав материнской микробиоты.

Исследовать влияние микробиоты грудного молока на профили микроРНК, присутствующие в молоке.

Изучите влияние микробиоты грудного молока на микробиоту кишечника младенцев. Изучите связи между микроРНК грудного молока, микробиотой кишечника ребенка и воспалением кишечника у младенцев.

Вторичные критерии оценки:

Корреляции между профилями микроРНК грудного молока от D1 до D60 и микробиотой кишечника младенцев, находящихся на грудном вскармливании, от D1 до M12.

Корреляции между микробиотой грудного молока и профилями микроРНК грудного молока от D1 до D60.

Корреляции между микробиотой грудного молока от D1 до D60 и микробиотой фекалий младенцев от D1 до M12.

Прямые корреляции между (1) микроРНК грудного молока и измерением фекального кальпротектина у младенцев от Д1 до Д60 и (2) микробиотой кишечника ребенка и фекальным кальпротектином у младенцев от Д1 до Д60.

Для решения исследовательского вопроса мы планируем включить 200 диад мать-ребенок. Наша цель – создать 30 диад с исключительно грудным вскармливанием в течение как минимум двух месяцев и 30 диад, в которых ребенок не будет получать грудное молоко. Каждая диада будет участвовать в исследовании в течение 12 месяцев, а этап набора продлится 18 месяцев.

При рождении ребенка мы возьмем образцы стула матери и ребенка, а также образец грудного молока матери.

Через 10, 30 и 60 дней после рождения ребенка мы запросим образец грудного молока у матери и образец кала у ребенка.

В 6 и 12 месяцев у младенца будет собран только образец стула. Во время каждого визита координатор клинических исследований связывается с матерями, чтобы собрать информацию как об их здоровье и диете, так и о здоровье и диете их ребенка.

Анализ микроРНК в образцах грудного молока и стула: микроРНК будут экстрагированы из образцов стула и грудного молока младенцев с использованием секвенирования Illumina нового поколения (NGS). Затем 10 наиболее распространенных микроРНК будут проверены с помощью кПЦР. Общие профили микроРНК будут проанализированы с использованием анализа главных координат (PCoA).

Анализ микробиоты кишечника и грудного молока. Образцы стула и грудного молока будут использоваться для секвенирования гена 16S рРНК для анализа микробного состава. Профили микробиоты также будут изучены с использованием анализа главных координат (PCoA).