Allogent multivirus - riktade cytotoxiska T-lymfocyter (CTL)

Virala infektioner kontrolleras normalt av T-cellsimmunitet och är därför en viktig orsak till sjuklighet och dödlighet under perioden av immunåterhämtning efter hematopoetisk stamcellstransplantation (HSCT).1 Risken för infektion påverkas av graden av vävnadsmissanpassning mellan donator och mottagaren och donatorns immunstatus, inklusive graden och längden av immunsuppression efter transplantation. Reaktivering av latenta virus som cytomegalovirus (CMV) och Epstein-Barr-virus (EBV) är vanliga och orsakar ofta symtomatisk sjukdom. Luftvägsvirus som adenovirus orsakar också ofta infektion. Antivirala farmakologiska medel är endast effektiva mot vissa av dessa virus; deras användning är kostsam och förknippad med betydande toxiciteter och utväxten av läkemedelsresistenta mutanter. Eftersom försening i återhämtningen av virusspecifik cellulär immunrespons är tydligt associerad med viral reaktivering och sjukdom hos dessa patienter, är cellulär immunterapi för att återställa virusspecifik immunitet ett attraktivt alternativ som redan framgångsrikt har använts för att rikta in sig på några av dessa virus.

Multivirusspecifika T-celler

För att bredda specificiteten för enstaka CTL-linjer till att inkludera de tre vanligaste virala patogenerna hos stamcellsmottagare, reaktiverade utredarna CMV- och adenovirusspecifika T-celler genom att använda mononukleära celler transducerade med en rekombinant adenoviral vektor som kodar för CMV-antigenet pp65 (Ad5f35CMVpp65). Efterföljande stimuleringar med EBV-LCL transducerad med samma vektor reaktiverade både EBV-specifika T-celler och bibehöll expansionen av det aktiverade adenoviruset och CMV-specifika T-cellerna. Denna metod producerade tillförlitligt CTL med cytotoxisk funktion specifik för alla tre virus, som utredare infunderade i 14 stamcellsmottagare i en fas I-profylaxstudie. De observerade återhämtning av immunitet mot CMV och EBV hos alla patienter, men en ökning av adenovirusspecifika T-celler sågs endast hos patienter som hade tecken på adenovirusinfektion före infusion. En uppföljningsstudie där frekvensen av adenovirusspecifika T-celler ökades i de infunderade CTL:erna gav liknande resultat, vilket belyser vikten av endogent antigen för att främja expansionen av infunderade T-celler in vivo. Icke desto mindre kunde alla patienter i båda de kliniska prövningarna med pre-infusion CMV-, adenovirus- eller EBV-infektion eller reaktivering klara infektionen, inklusive en patient med svår adenoviral lunginflammation som krävde ventilationsstöd. CTL:er som känner igen flera antigener kan därför producera kliniskt relevanta effekter mot alla tre virus.

CTL för HSCT-patienter med virusnaiva donatorer

Alla donatorspecifika T-cellstrategier som diskuterats hittills har använt produkter som härrör från donatorer som är seropositiva för viruset av intresse. Med den ökande användningen av navelsträngsblod (CB)-transplantat finns det ett betydande antal patienter som är mottagare av virusnaiva donatortransplantat. CMV-reaktivering sker vanligtvis från endogent virus och seropositiva mottagare med seronegativa donatorer är fortfarande den högsta riskgruppen för att utveckla CMV. Utvecklingen av multivirusspecifika T-celler från mottagare av navelsträngsblodtransplantat kräver priming av naiva T-celler snarare än en enkel expansion av redan existerande minnes-T-celler från seropositiva donatorer. Genom att använda ett protokoll som stimulerar CB-härledda T-celler med autologa CB-härledda dendritiska celler och EBV-LCL transducerad med Ad5f35CMVpp65-vektorn i närvaro av IL-7, 12 och 15, kan multivirusspecifika T-celler primas in vitro från de 20 % fraktion av en navelsträngsblodenhet. Hittills har åtta patienter fått CTL som profylax eller behandling efter KBT utan toxicitet. Inga infusionsrelaterade toxiciteter/GvHD har observerats och trots att de endast fått 80 % av CB-enheten, ympade alla patienter neutrofiler inom 30 dagar. Tidiga bevis på effekt har också visats med eliminering av EBV, CMV och adenovirus hos två patienter och minskande EBV-virusmängd hos en tredje, medan de andra 5 patienterna förblir virusfria. Därför tyder dessa resultat på att överföring av naiva T-cell (CB)-härledda virusspecifika T-celler till patienter efter KBT kan vara säker och underlätta långvarig rekonstitution av virusspecifika T-celler in vivo.