Allogeniczny Multiwirus - Skierowane Cytotoksyczne Limfocyty T (CTL)

Infekcje wirusowe są zwykle kontrolowane przez odporność limfocytów T i dlatego są ważną przyczyną zachorowalności i śmiertelności w okresie regeneracji odporności po przeszczepieniu hematopoetycznych komórek macierzystych (HSCT).1 Na ryzyko zakażenia ma wpływ stopień niedopasowania tkanek między dawcą a biorcy i statusu immunologicznego dawcy, w tym stopnia i czasu trwania immunosupresji po przeszczepie. Reaktywacja utajonych wirusów, takich jak wirus cytomegalii (CMV) i wirus Epsteina-Barra (EBV), jest powszechna i często powoduje chorobę objawową. Wirusy układu oddechowego, takie jak adenowirus, również często powodują infekcję. Przeciwwirusowe środki farmakologiczne są skuteczne tylko przeciwko niektórym z tych wirusów; ich stosowanie jest kosztowne i wiąże się ze znaczną toksycznością oraz rozwojem mutantów lekoopornych. Ponieważ opóźnienie w odzyskiwaniu komórkowej odpowiedzi immunologicznej specyficznej dla wirusa jest wyraźnie związane z reaktywacją wirusa i chorobą u tych pacjentów, immunoterapia komórkowa w celu przywrócenia odporności specyficznej dla wirusa jest atrakcyjną opcją, którą już z powodzeniem zastosowano do celowania w niektóre z tych wirusów.

Komórki T specyficzne dla wielu wirusów

Aby poszerzyć specyficzność pojedynczych linii CTL, aby obejmowała trzy najczęstsze patogeny wirusowe biorców komórek macierzystych, badacze reaktywowali komórki T specyficzne dla CMV i adenowirusa, stosując komórki jednojądrzaste transdukowane rekombinowanym wektorem adenowirusowym kodującym antygen CMV pp65 (Ad5f35CMVpp65). Kolejne stymulacje EBV-LCL transdukowane tym samym wektorem zarówno reaktywowały komórki T specyficzne dla EBV, jak i utrzymywały ekspansję aktywowanych komórek T specyficznych dla adenowirusa i CMV. Ta metoda niezawodnie wytworzyła CTL o funkcji cytotoksycznej swoistej dla wszystkich trzech wirusów, które badacze wstrzyknęli 14 biorcom komórek macierzystych w badaniu profilaktycznym fazy I. Zaobserwowali powrót odporności na CMV i EBV u wszystkich pacjentów, ale wzrost liczby limfocytów T swoistych dla adenowirusa zaobserwowano tylko u pacjentów, u których wystąpiły dowody zakażenia adenowirusem przed infuzją. Dalsze badanie, w którym zwiększono częstotliwość limfocytów T specyficznych dla adenowirusa we wlewie CTL, dało podobne wyniki, podkreślając w ten sposób znaczenie endogennego antygenu dla promowania ekspansji limfocytów T poddanych infuzji in vivo. Niemniej jednak wszyscy pacjenci w obu badaniach klinicznych z infekcją lub reaktywacją CMV, adenowirusem lub EBV przed infuzją byli w stanie usunąć infekcję, w tym jeden pacjent z ciężkim adenowirusowym zapaleniem płuc wymagającym wspomagania wentylacji. CTL rozpoznające wiele antygenów mogą zatem wywoływać klinicznie istotne efekty przeciwko wszystkim trzem wirusom.

CTL dla pacjentów HSCT z dawcami naiwnymi wirusami

Wszystkie omówione dotychczas strategie limfocytów T specyficzne dla dawcy wykorzystywały produkty pochodzące od dawców, którzy są seropozytywni względem wirusa będącego przedmiotem zainteresowania. Wraz z rosnącym wykorzystaniem przeszczepów krwi pępowinowej (CB) istnieje znaczna liczba pacjentów, którzy są biorcami przeszczepów od dawców nieleczonych wirusem. Reaktywacja CMV zwykle występuje u endogennego wirusa, a seropozytywni biorcy z dawcami seronegatywnymi pozostają grupą najwyższego ryzyka rozwoju CMV. Rozwój komórek T swoistych dla wielu wirusów od biorców przeszczepów krwi pępowinowej wymaga primowania naiwnych komórek T, a nie prostej ekspansji wcześniej istniejących komórek T pamięci od dawców seropozytywnych. Stosując protokół stymulacji komórek T pochodzących z CB autologicznymi komórkami dendrytycznymi pochodzącymi z CB i EBV-LCL transdukowanymi wektorem Ad5f35CMVpp65 w obecności IL-7, 12 i 15, limfocyty T swoiste dla wielu wirusów można przygotować in vitro z 20 % frakcji jednostki krwi pępowinowej. Jak dotąd ośmiu pacjentów otrzymało CTL jako profilaktykę lub leczenie po CBT bez toksyczności. Nie zaobserwowano żadnych toksyczności związanych z infuzją/GvHD i pomimo otrzymania tylko 80% jednostki CB, u wszystkich pacjentów wszczepiono neutrofile w ciągu 30 dni. Wykazano również wczesne dowody skuteczności, polegające na usunięciu EBV, CMV i adenowirusa u dwóch pacjentów oraz zmniejszeniu miana wirusa EBV u trzeciego, przy czym pozostałych 5 pacjentów pozostało wolnych od wirusa. Dlatego wyniki te sugerują, że przeniesienie komórek T swoistych dla wirusa pochodzących z naiwnych komórek T (CB) pacjentom po CBT może być bezpieczne i ułatwić długoterminową rekonstytucję komórek T specyficznych dla wirusa in vivo.