Аллогенные мультивирусы - направленные цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТЛ)

Вирусные инфекции обычно контролируются Т-клеточным иммунитетом и поэтому являются важной причиной заболеваемости и смертности в период восстановления иммунитета после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК).1 На риск инфекции влияет степень несоответствия тканей донора и реципиент и иммунный статус донора, включая степень и продолжительность иммуносупрессии после трансплантации. Реактивация латентных вирусов, таких как цитомегаловирус (ЦМВ) и вирус Эпштейна-Барра (ВЭБ), является обычным явлением и часто вызывает симптоматическое заболевание. Респираторные вирусы, такие как аденовирусы, также часто вызывают инфекцию. Противовирусные фармакологические средства эффективны только против некоторых из этих вирусов; их использование является дорогостоящим и связано со значительной токсичностью и появлением устойчивых к лекарствам мутантов. Поскольку задержка восстановления вирусспецифического клеточного иммунного ответа явно связана с реактивацией вируса и заболеванием у этих пациентов, клеточная иммунотерапия для восстановления вирусспецифического иммунитета является привлекательным вариантом, который уже успешно использовался для воздействия на некоторые из этих вирусов.

Мультивирус-специфические Т-клетки

Чтобы расширить специфичность отдельных линий ЦТЛ, чтобы включить три наиболее распространенных вирусных патогена реципиентов стволовых клеток, исследователи реактивировали ЦМВ и аденовирус-специфические Т-клетки, используя мононуклеарные клетки, трансдуцированные рекомбинантным аденовирусным вектором, кодирующим антиген ЦМВ pp65 (Ad5f35CMVpp65). Последующие стимуляции EBV-LCL, трансдуцированные тем же вектором, как реактивировали EBV-специфические Т-клетки, так и поддерживали размножение активированного аденовируса и CMV-специфических Т-клеток. Этот метод надежно продуцировал ЦТЛ с цитотоксической функцией, специфичной для всех трех вирусов, которые исследователи вводили 14 реципиентам стволовых клеток в профилактическом исследовании фазы I. Они наблюдали восстановление иммунитета к ЦМВ и ВЭБ у всех пациентов, но увеличение аденовирус-специфических Т-клеток наблюдалось только у пациентов, у которых до инфузии были признаки аденовирусной инфекции. Последующее исследование, в котором частота аденовирус-специфических Т-клеток была увеличена в инфузированных ЦТЛ, дало аналогичные результаты, тем самым подчеркнув важность эндогенного антигена для стимуляции размножения инфузированных Т-клеток in vivo. Тем не менее, у всех пациентов в обоих клинических испытаниях с ЦМВ-, аденовирусной или ВЭБ-инфекцией или реактивацией до инфузии удалось избавиться от инфекции, в том числе у одного пациента с тяжелой аденовирусной пневмонией, требующей искусственной вентиляции легких. Таким образом, ЦТЛ, распознающие несколько антигенов, могут оказывать клинически значимое действие против всех трех вирусов.

ЦТЛ для пациентов с ТГСК от доноров, не инфицированных вирусом

Во всех обсуждавшихся до сих пор стратегиях донор-специфических Т-клеток использовались продукты, полученные от доноров, серопозитивных в отношении представляющего интерес вируса. С увеличением использования трансплантатов пуповинной крови (ПК) заметно число пациентов, которые являются реципиентами донорских трансплантатов, не зараженных вирусом. Реактивация ЦМВ обычно происходит от эндогенного вируса, и серопозитивные реципиенты с серонегативными донорами остаются группой самого высокого риска развития ЦМВ. Развитие мультивирус-специфических Т-клеток у реципиентов трансплантатов пуповинной крови требует примирования наивных Т-клеток, а не простой экспансии ранее существовавших Т-клеток памяти у серопозитивных доноров. Используя протокол, стимулирующий Т-клетки, происходящие из CB, с помощью аутологичных дендритных клеток, происходящих из CB, и EBV-LCL, трансдуцированных вектором Ad5f35CMVpp65 в присутствии IL-7, 12 и 15, мультивирус-специфические Т-клетки можно примировать in vitro из 20 % доля единицы пуповинной крови. До сих пор восемь пациентов получали ЦТЛ в качестве профилактики или лечения после КПТ без токсичности. Никакой токсичности, связанной с инфузией/РТПХ, не наблюдалось, и, несмотря на получение только 80% единиц CB, у всех пациентов прижились нейтрофилы в течение 30 дней. Ранние доказательства эффективности также были продемонстрированы элиминацией EBV, CMV и аденовируса у двух пациентов и снижением вирусной нагрузки EBV у третьего, а остальные 5 пациентов остались свободными от вируса. Таким образом, эти результаты свидетельствуют о том, что перенос вирусспецифических Т-клеток, полученных из наивных Т-клеток (CB), пациентам после КПТ может быть безопасным и способствовать долгосрочному восстановлению вирусспецифических Т-клеток in vivo.