Allogenní multivirus – řízené cytotoxické T lymfocyty (CTL)

Virové infekce jsou normálně kontrolovány imunitou T-buněk, a jsou tak důležitou příčinou morbidity a mortality během období imunitního zotavení po transplantaci hematopoetických kmenových buněk (HSCT).1 Riziko infekce je ovlivněno mírou nesouladu tkání mezi dárcem a dárcem. příjemce a imunitní stav dárce, včetně stupně a délky imunosuprese po transplantaci. Reaktivace latentních virů, jako je cytomegalovirus (CMV) a virus Epstein-Barrové (EBV), jsou běžné a často způsobují symptomatická onemocnění. Respirační viry, jako je adenovirus, také často způsobují infekci. Antivirová farmakologická činidla jsou účinná pouze proti některým z těchto virů; jejich použití je nákladné a je spojeno s významnou toxicitou a růstem mutantů odolných vůči léčivům. Protože zpoždění obnovy virově specifické buněčné imunitní odpovědi je jasně spojeno s virovou reaktivací a onemocněním u těchto pacientů, je buněčná imunoterapie k obnovení virově specifické imunity atraktivní možností, která již byla úspěšně použita k zacílení některých z těchto virů.

Multivirus-specifické T buňky

Aby se rozšířila specificita jednotlivých CTL linií tak, aby zahrnovaly tři nejběžnější virové patogeny příjemců kmenových buněk, výzkumníci reaktivovali CMV a adenovirově specifické T buňky pomocí mononukleárních buněk transdukovaných rekombinantním adenovirovým vektorem kódujícím CMV antigen pp65 (Ad5f35CMVpp65). Následné stimulace s EBV-LCL transdukovaným stejným vektorem jak reaktivovaly EBV-specifické T buňky, tak udržovaly expanzi aktivovaného adenoviru a CMV-specifických T buněk. Tato metoda spolehlivě produkovala CTL s cytotoxickou funkcí specifickou pro všechny tři viry, které výzkumníci podali infuzí 14 příjemcům kmenových buněk ve fázi I profylaktické studie. Pozorovali obnovení imunity vůči CMV a EBV u všech pacientů, ale zvýšení počtu T-buněk specifických pro adenovirus bylo pozorováno pouze u pacientů, u kterých byla před infuzí prokázána adenovirová infekce. Následná studie, ve které byla frekvence T-buněk specifických pro adenovirus zvýšena v CTL infundovaných infuzí, poskytla podobné výsledky, čímž se zdůraznil význam endogenního antigenu pro podporu expanze in vivo infundovaných T buněk. Nicméně všichni pacienti v obou klinických studiích s preinfuzní CMV, adenovirovou nebo EBV infekcí nebo reaktivací byli schopni infekci vyléčit, včetně jednoho pacienta s těžkou adenovirovou pneumonií vyžadující ventilační podporu. CTL rozpoznávající více antigenů mohou proto vyvolat klinicky relevantní účinky proti všem třem virům.

CTL pro pacienty s HSCT s naivními dárci virů

Všechny dosud diskutované strategie T-buněk specifické pro dárce využívaly produkty odvozené od dárců, kteří jsou séropozitivní pro požadovaný virus. Se vzrůstajícím používáním štěpů pupečníkové krve (CB) existuje značný počet pacientů, kteří jsou příjemci dárcovských štěpů od dosud naivních virů. K reaktivaci CMV obvykle dochází z endogenního viru a séropozitivní příjemci se séronegativními dárci zůstávají skupinou s nejvyšším rizikem pro rozvoj CMV. Vývoj multivirových specifických T-buněk od příjemců štěpů pupečníkové krve vyžaduje aktivaci naivních T-buněk spíše než jednoduchou expanzi již existujících paměťových T-buněk od séropozitivních dárců. Použitím protokolu stimulujícího T-buňky odvozené od CB s autologními dendritickými buňkami odvozenými od CB a EBV-LCL transdukované vektorem Ad5f35CMVpp65 v přítomnosti IL-7, 12 a 15, mohou být multivirové specifické T buňky primovány in vitro od 20. % zlomku jednotky pupečníkové krve. Dosud osm pacientů dostalo CTL jako profylaxi nebo léčbu po CBT bez toxicity. Nebyly pozorovány žádné toxicity/GvHD související s infuzí, a přestože dostali pouze 80 % CB jednotky, všichni pacienti během 30 dnů přihojili neutrofily. Včasný důkaz účinnosti byl také prokázán odstraněním EBV, CMV a adenoviru u dvou pacientů a snížením virové zátěže EBV u třetího, přičemž dalších 5 pacientů zůstalo bez virů. Tyto výsledky tedy naznačují, že přenos naivních T lymfocytů (CB) odvozených od viru specifických T lymfocytů pacientům po CBT může být bezpečný a může usnadnit dlouhodobou rekonstituci T lymfocytů specifických pro virus in vivo.