Lung-PGD-biomarkörer hos organdonatorer

Primär graftdysfunktion (PGD) är ansvarig för hög tidig dödlighet hos lungtransplanterade patienter.

Logisk grund

Utvecklingen av lungtransplantation kan kompliceras av primär graftdysfunktion (PGD), en form av akut andnödsyndrom orsakat av ischemi-reperfusionsrelaterade fenomen. PGD ​​förekommer i 15-50 % av fallen och är ansvarig för en betydande ökning av dödligheten, varaktigheten av assisterad ventilation och vårdtiden på intensivvården. Det är också en viktig riskfaktor för utveckling på medellång sikt av akut och långvarig avstötning, av bronkiolit obliterans syndrom (BOS) - kronisk avstötning - vilket drastiskt minskar transplantatets överlevnad.

Tensidproteiner som omfattar det sekretoriska proteinet från Clara-celler (16-kd Clara-cellprotein-CC16) och ytaktiva proteiner -A (SP-A), -B (SP-B) och -D (SP-D) känns igen som markörer för permeabiliteten av den alveolokapillära barriären.

Baserat på dessa fynd, postulerar vi att genuttrycket av CC16, SP-A, -B och D förändras i lungbiopsier utförda hos donatorer av patienter som utvecklar primär transplantatdysfunktion efter lungtransplantation jämfört med de som utförs hos donatorer från patienter som är fria från detta syndrom.

Denna studie skulle därför kunna vara ett komplement till objektiv bedömning av lungkvalitet före transplantation.

Syfte och mål

1. Beskriv, hos organdonatorn, förändringar i uttryck av Clara Cell Protein (CC16), tensidassocierade proteiner (A, B eller D), pro- och antiinflammatoriska cytokiner i cirkulerande blod och lungvävnad under organåterhämtning.
2. Beskriv de biologiska och strukturella förändringarna efter perioden med kall ischemi.
3. Upprätta en korrelation mellan biomarkörer hos organdonatorn och förekomsten av akut graftdysfunktion hos lungmottagaren.

Material och metod

Inklusionskriterier

Alla lungorgandonatorpatienter som hänvisas till vårt nätverk och deras mottagare kommer att inkluderas efter att ha erhållit deras informerade samtycke.

Datainsamling

Hos givaren kommer vi att registrera demografiska data (ålder, kön), historia, dödsorsak, blodgasmätning, lungröntgenprotokoll, biologiska parametrar för blod, varaktighet av hjärndöd om så är lämpligt och tid för het ischemi om så är lämpligt och protokoll för bakteriologiska analyser.

I mottagaren kommer vi att registrera demografiska data (ålder, kön), indikation på transplantation, resultat av höger kateterisering utförd på pre-transplantation, standard intraoperativa data, immunsuppression, Blodgas, lungröntgenprotokoll, fyllnadsbalans och blodbiologisk parametrar vid 24, 48 och 72h. Klämningstiderna registreras.

Patienterna följs automatiskt upp resten av livet. Iterativa biopsier utförs under det första året för att upptäcka eventuell akut avstötning. Data kommer att ingå i vår studie.

Biologiska prover

Hos donatorn, före perfusionen av konserveringslösningarna, tas 18 cc perifert blod (torrt rör, 9 cc). 1 rör kommer att förvaras vid -80 ° C., det andra kommer att centrifugeras (15 minuter, 10000 / min, 20 ° C.) och sedan kommer serumet att förvaras vid -80 ° C.

Omedelbart efter lungåterhämtning görs en lungbiopsi (6 cm2) vid de nedre loberna.

Ett fragment kommer omedelbart att placeras i flytande kväve och lagras vid -80 ° C. Ett andra fragment lagras i formalin under 24 timmar och lagras sedan i paraffinblock.

Före implantation, i slutet av konserveringsperioden, görs en ny lungbiopsi i de nedre loberna.

Biologiska analyser

Histologisk undersökning och gradering

Lungvävnad fixerad i formalin färgas med hematoxylin-eosin för att gradera lungskador [(1) neutrofilinfiltration, (2) skada på luftvägarnas epitelceller, (3) interstitiellt ödem, (4) hyalinmembran och (5) blödning].

Inflammation, apoptos och ytaktiva proteiner

O VävnadsmRNA-mätningar: kvantifierings-PCR i realtid (RTQ-PCR)

O Vävnadspeptidmätningar: Western Blot - ELISA - MILLIPLEX

O Behandling av blodprover och analyser: ELISA - MILLIPLEX

Proteininflammatoriska cytokiner (TNF-alfa, IL-6, IL-8, IL-1, IL33) (IL-10), intercellulära adhesionsmolekyler (ICAM-1, VCAM-1), apoptos (Bax, Bcl2, Caspases)

Utvärdering av apoptos: TUNEL - Immunhistokemi