Биомаркеры PGD легких у доноров органов

Первичная дисфункция трансплантата (ПГД) является причиной высокой ранней смертности у пациентов с пересаженным легким.

Обоснование

Эволюция трансплантации легких может быть осложнена первичной дисфункцией трансплантата (ПГД), формой острого респираторного дистресс-синдрома, вызванного явлениями, связанными с ишемией-реперфузией. ПГД встречается в 15-50% случаев и является причиной значительного увеличения смертности, продолжительности вспомогательной вентиляции и продолжительности пребывания в реанимации. Это также важный фактор риска среднесрочного развития острого и долговременного отторжения, синдрома облитерирующего бронхиолита (СОБ) - хронического отторжения, что резко снижает выживаемость трансплантата.

В качестве маркеров проницаемость альвеолокапиллярного барьера.

Основываясь на этих результатах, мы постулируем, что экспрессия генов CC16, SP-A, -B и D изменена в биопсиях легких, выполненных у доноров пациентов с первичной дисфункцией трансплантата после трансплантации легких, по сравнению с биопсиями, выполненными у доноров пациентов без этот синдром.

Таким образом, это исследование может быть дополнительным средством объективной оценки качества легких перед трансплантацией.

Цели и задачи

1. Опишите у донора органов изменения экспрессии клеточного белка Clara (CC16), белков, ассоциированных с сурфактантом (A, B или D), про- и противовоспалительных цитокинов в циркулирующей крови и легочной ткани во время восстановления органа.
2. Опишите биологические и структурные изменения после периода холодовой ишемии.
3. Установить корреляцию между биомаркерами у донора органов и возникновением острой дисфункции трансплантата у реципиента легкого.

Материал и метод

Критерии включения

Все пациенты-доноры органов легких, направленные в нашу сеть, и их реципиенты будут включены после получения их информированного согласия.

Сбор информации

У донора мы будем записывать демографические данные (возраст, пол), историю, причину смерти, измерение газов крови, протокол рентгенографии грудной клетки, биологические параметры крови, продолжительность смерти мозга, если это необходимо, и время горячей ишемии, если это необходимо, и протокол бактериологические анализы.

У реципиента мы будем записывать демографические данные (возраст, пол), показания к трансплантации, результаты правой катетеризации, выполненной перед трансплантацией, стандартные интраоперационные данные, иммуносупрессию, газы крови, протокол рентгенографии грудной клетки, баланс наполнения и биологический анализ крови. параметры через 24, 48 и 72 часа. Время сброса фиксируется.

Пациенты автоматически находятся под наблюдением всю оставшуюся жизнь. Повторные биопсии выполняются в течение первого года для выявления возможного острого отторжения. Данные будут включены в наше исследование.

Биологические образцы

У донора перед перфузией консервирующих растворов берут 18 мл периферической крови (сухая пробирка, 9 мл). 1 пробирку будут хранить при -80°С, другую центрифугируют (15 минут, 10000 об/мин, 20°С) и затем сыворотку будут хранить при -80°С.

Сразу после восстановления легкого выполняется биопсия легких (6 см2) нижних долей.

Фрагмент немедленно помещают в жидкий азот и хранят при температуре -80°С. Второй фрагмент хранят в формалине в течение 24 часов, а затем хранят в парафиновых блоках.

Перед имплантацией в конце периода консервации проводят новую биопсию легких в нижних долях.

Биологические анализы

Гистологическое исследование и градация

Ткани легких, фиксированные в формалине, окрашивают гематоксилин-эозином для градации поражений легких [(1) нейтрофильная инфильтрация, (2) повреждение эпителиальных клеток дыхательных путей, (3) интерстициальный отек, (4) гиалиновая мембрана и (5) кровоизлияние].

Воспаление, апоптоз и сурфактантные белки

O Измерение тканевой мРНК: количественная ПЦР в режиме реального времени (RTQ-PCR)

O Измерение содержания пептидов в тканях: Вестерн-блоттинг – ИФА – MMILLIPLEX

O Обработка образцов крови и анализов: ИФА - MILLIPLEX

Белковые воспалительные цитокины (TNF-альфа, IL-6, IL-8, IL-1, IL33) (IL-10), молекулы межклеточной адгезии (ICAM-1, VCAM-1), апоптоз (Bax, Bcl2, каспазы)

Оценка апоптоза: TUNEL - Иммуногистохимия