장기 기증자의 폐 PGD 바이오마커

1차 이식 기능 장애(PGD)는 폐 이식 환자의 높은 조기 사망률의 원인입니다.

이론적 해석

폐 이식의 발전은 허혈 재관류 관련 현상으로 인한 급성 호흡 곤란 증후군의 한 형태인 일차 이식 기능 장애(PGD)로 인해 복잡해질 수 있습니다. PGD는 사례의 15-50%에서 발생하며 사망률, 보조 환기 기간 및 중환자실 체류 기간의 상당한 증가에 대한 책임이 있습니다. 이는 또한 이식편의 생존을 급격하게 감소시키는 폐쇄세기관지염 증후군(BOS)(만성 거부반응)의 급성 및 장기 거부반응의 중기 발달에 대한 중요한 위험 인자입니다.

Clara 세포의 분비 단백질(16-kd Clara cell protein-CC16)과 계면활성제 단백질 -A(SP-A), -B(SP-B) 및 -D(SP-D)를 포함하는 계면활성제 단백질은 폐포 모세관 장벽의 투과성.

이러한 발견에 기초하여, 우리는 CC16, SP-A, -B 및 D의 유전자 발현이 폐 이식 후 일차 이식편 기능 장애가 발생한 환자의 기증자에서 수행된 폐 생검에서 그렇지 않은 환자의 기증자에서 수행된 것과 비교하여 변경되었다고 가정합니다. 이 증후군.

따라서 이 연구는 이식 전에 폐의 질을 객관적으로 평가하는 보완적인 수단이 될 수 있습니다.

목표와 목적

1. 장기 기증자에서 장기 복구 동안 순환하는 혈액 및 폐 조직에서 Clara 세포 단백질(CC16), 계면활성제 관련 단백질(A, B 또는 D), 프로 및 항염증성 사이토카인의 발현 변화를 설명합니다.
2. 저온 허혈 기간 이후의 생물학적 및 구조적 변화를 설명합니다.
3. 장기 기증자의 바이오마커와 폐 수용자의 급성 이식 기능 장애 발생 사이의 상관관계를 확립합니다.

재료 및 방법

포함 기준

우리 네트워크에 추천된 모든 폐 장기 기증 환자와 그 수혜자는 정보에 입각한 동의를 얻은 후 포함됩니다.

데이터 수집

기증자에게 인구통계학적 데이터(연령, 성별), 병력, 사망 원인, 혈액 가스 측정, 흉부 X-레이 프로토콜, 혈액 생물학적 매개변수, 적절한 경우 뇌사 기간 및 적절한 경우 열성 허혈 시간 및 프로토콜을 기록합니다. 세균학적 분석.

수혜자의 인구 통계학적 데이터(연령, 성별), 이식의 적응증, 이식 전 수행된 올바른 카테터 삽입 결과, 표준 수술 중 데이터, 면역억제, 혈액 가스, 흉부 X-레이 프로토콜, 충전 균형 및 혈액 생물학적 24, 48 및 72h의 매개변수. 디클램핑 시간이 기록됩니다.

환자는 남은 생애 동안 자동으로 추적됩니다. 가능한 급성 거부반응을 감지하기 위해 첫 해에 반복적인 생검을 시행합니다. 데이터는 우리 연구에 포함될 것입니다.

생물학적 샘플

기증자에서 보존 용액을 관류하기 전에 18cc의 말초 혈액을 채취합니다(건조 튜브, 9cc). 1개의 튜브는 -80℃에 보관하고, 다른 튜브는 원심분리(15분, 10000/분, 20℃)한 후 혈청을 -80℃에 보관한다.

폐 회복 직후 하엽에서 폐 생검(6cm2)을 시행합니다.

조각은 즉시 액체 질소에 넣고 -80 ° C에서 저장합니다. 두 번째 조각은 24시간 동안 포르말린에 저장한 다음 파라핀 블록에 저장합니다.

이식 전 보존 기간이 끝나면 하엽에서 새로운 폐 생검을 시행합니다.

생물학적 분석

조직학적 검사 및 그라데이션

포르말린에 고정된 폐 조직을 헤마톡실린-에오신으로 염색하여 폐 병변을 점진적으로 분류합니다[(1) 호중구 침윤, (2) 기도 상피 세포 손상, (3) 간질 부종, (4) 유리막 및 (5) 출혈].

염증, 세포 사멸 및 계면 활성제 단백질

O 조직 mRNA 측정: 실시간 정량화 PCR(RTQ-PCR)

O 조직 펩타이드 측정: Western Blot - ELISA - MILLIPLEX

O 혈액 샘플 처리 및 분석: ELISA - MILLIPLEX

단백질 염증성 사이토카인(TNF-알파, IL-6, IL-8, IL-1, IL33)(IL-10), 세포간 접착 분자(ICAM-1, VCAM-1), 세포사멸(Bax, Bcl2, Caspases)

아폽토시스의 평가: TUNEL - 면역조직화학