Keuhkojen PGD-biomarkkerit elinluovuttajilla

Primaarinen siirteen toimintahäiriö (PGD) on vastuussa korkeasta varhaisesta kuolleisuudesta keuhkosiirtopotilailla.

Perustelut

Keuhkonsiirron kehitystä voi monimutkaistaa primaarinen siirteen toimintahäiriö (PGD), akuutin hengitysvaikeusoireyhtymän muoto, jonka aiheuttaa iskemia-reperfuusioon liittyvät ilmiöt. PGD:tä esiintyy 15–50 %:ssa tapauksista, ja se on vastuussa merkittävästä kuolleisuuden lisääntymisestä, avusteisen ventilaation kestosta ja tehohoidossa oleskelun pituudesta. Se on myös tärkeä riskitekijä keskipitkällä aikavälillä akuutin ja pitkäaikaisen hyljintäreaktion, bronchiolitis obliterans -oireyhtymän (BOS) - kroonisen hyljintäreaktion - kehittymiselle, mikä vähentää dramaattisesti siirteen eloonjäämistä.

Pinta-aktiiviset proteiinit, jotka sisältävät Clara-solujen eritysproteiinia (16-kd Clara-soluproteiini-CC16) ja pinta-aktiiviset proteiinit -A (SP-A), -B (SP-B) ja -D (SP-D), tunnistetaan alveolokapillaariesteen läpäisevyys.

Näiden löydösten perusteella oletamme, että CC16:n, SP-A:n, -B:n ja D:n geeniekspressio on muuttunut keuhkobiopsioissa, jotka on tehty sellaisten potilaiden luovuttajille, joilla on primaarinen siirteen toimintahäiriö keuhkonsiirron jälkeen verrattuna niihin, jotka on tehty sellaisten potilaiden luovuttajille, joilla ei ole tämä syndrooma.

Tämä tutkimus voisi siksi olla täydentävä keino keuhkojen laadun objektiiviseen arviointiin ennen siirtoa.

Päämäärät ja tavoitteet

1. Kuvaile elimen luovuttajalla muutoksia Clara Cell Proteinin (CC16), pinta-aktiivisiin aineisiin liittyvien proteiinien (A, B tai D), pro- ja anti-inflammatoristen sytokiinien ekspressiossa kiertävässä veressä ja keuhkokudoksessa elimen toipumisen aikana.
2. Kuvaile biologisia ja rakenteellisia muutoksia kylmäiskemian jakson jälkeen.
3. Määritä korrelaatio elimen luovuttajan biomarkkereiden ja keuhkojen vastaanottajan akuutin siirteen toimintahäiriön välillä.

Materiaali ja menetelmä

Sisällyttämiskriteerit

Kaikki verkostoomme lähetetyt keuhkoelinten luovuttajapotilaat ja heidän vastaanottajansa otetaan mukaan heidän tietoisen suostumuksensa saatuaan.

Tiedonkeruu

Luovuttajaan kirjaamme demografiset tiedot (ikä, sukupuoli), historian, kuolinsyyn, verikaasumittauksen, rintakehän röntgenprotokollan, veren biologiset parametrit, aivokuoleman keston tarvittaessa ja kuumaiskemian ajan tarvittaessa ja protokollan bakteriologiset analyysit.

Tallennamme vastaanottajaan demografiset tiedot (ikä, sukupuoli), siirtokuvauksen, ennen siirtoa suoritetun oikean katetrointitulokset, normaalit intraoperatiiviset tiedot, immunosuppressio, verikaasu, rintakehän röntgenprotokolla, täyttötasapaino ja veren biologiset tiedot parametrit 24, 48 ja 72 tuntia. Puristusajat kirjataan muistiin.

Potilaita seurataan automaattisesti koko loppuelämänsä ajan. Iteratiiviset biopsiat tehdään ensimmäisenä vuonna mahdollisen akuutin hyljinnän havaitsemiseksi. Tiedot sisällytetään tutkimukseemme.

Biologiset näytteet

Luovuttajalta otetaan ennen säilytysliuosten perfuusiota 18 cc perifeeristä verta (kuiva putki, 9 cc). Yksi putki säilytetään -80 °C:ssa, toinen sentrifugoidaan (15 minuuttia, 10 000 / min, 20 °C) ja sen jälkeen seerumi säilytetään -80 °C:ssa.

Välittömästi keuhkojen toipumisen jälkeen tehdään keuhkobiopsia (6 cm2) alalohkoista.

Fragmentti asetetaan välittömästi nestetyppeen ja säilytetään -80 °C:ssa. Toista fragmenttia säilytetään formaliinissa 24 tuntia ja säilytetään sitten parafiinilohkoissa.

Ennen implantointia, säilytysajan lopussa, tehdään uusi keuhkobiopsia alalohkoista.

Biologiset analyysit

Histologinen tutkimus ja asteikko

Formaliiniin kiinnitetyt keuhkokudokset värjätään hematoksyliini-eosiinilla keuhkovaurioiden graduoimiseksi [(1) neutrofiilien infiltraatio, (2) hengitysteiden epiteelisoluvaurio, (3) interstitiaalinen turvotus, (4) hyaliinikalvo ja (5) verenvuoto].

Tulehdus, apoptoosi ja pinta-aktiiviset proteiinit

O Kudosten mRNA-mittaukset: reaaliaikainen kvantifiointi-PCR (RTQ-PCR)

O Kudospeptidimittaukset: Western Blot - ELISA - MILLIPLEX

O Verinäytteiden ja analyysien käsittely: ELISA - MILLIPLEX

Proteiinin tulehdussytokiinit (TNF-alfa, IL-6, IL-8, IL-1, IL33) (IL-10), solujen väliset adheesiomolekyylit (ICAM-1, VCAM-1), apoptoosi (Bax, Bcl2, kaspaasit)

Apoptoosin arviointi: TUNEL - Immunohistokemia